一个水稻DEAD-box RNA解旋酶基因OsBIRH1的克隆鉴定

摘要

DEAD-boxRNA解旋酶在RNA的新陈代谢过程中起着重要作用，从RNA的合成到RNA的降解都需要它的存在，同时它对植物的生长发育和抗逆反应中起调控作用。克隆鉴定了一个水稻DEAD盒RNA解旋酶基因OsBIRHl。OsBIRHl基因全长cDNA为2167bp，包含一个1926bp的开放阅读框，编码一个641个氨基酸组成的蛋白，预测分子量为70.8kD。OsBIRHl基因位于水稻第3号染色体上，由8个外显子和7个内含子组成。预测的OsBIRHl蛋白包含DEAD盒解旋酶所特有的保守DEAD和HELICc结构域以及保守模体结构。系统进化树分析表明，OsBIRHl与拟南芥和人DEAD盒解旋酶有很高的同源性，氨基酸序列的一致性达到47％～54％。 为了研究水稻OsBIRHl蛋白的生化特性，我们将OsBIRHl的编码序列克隆到原核表达载体pRSET-A中，并纯化了重组OsBIRHl蛋白。携带有pRSETa-OsBIRHl质粒的细菌经IPTG诱导，用Ni-NTAHisBind树脂从包含体中纯化获得重组的OsBIRHl蛋白。SDS-PAGE电泳分析表明，重组OsBIRHl蛋白大小约为～75kDa，与其预测的分子量基本一致。 为了研究水稻OsBIRHl在抗病反应中的可能作用，我们构建了OsBIRHl的转基因双元载体，并用浸花法转化拟南芥。目前已经获得转基因种子，筛选和转基因植株的鉴定正在进行中。

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文摘

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论文说明：图表目录

致谢

1文献综述和研究背景

2材料与方法

3结果与分析

4讨论与后续工作

附图

参考文献