乙酸烯丙醇酮酯选择性水解菌种的筛选

摘要

烯丙菊酯是拟除虫菊酯家族中一类重要的杀虫剂，对室内昆虫具有快速杀灭的特效，并且对人畜无害。4-羟基-3-甲基-2-2-(2-烯丙基)-环戊烯酮(简称HMPC)，是合成烯丙菊酯的重要中间体。HMPC的两个对映体中，(S)-构型是活性组分，含有(S)-HMPC的烯丙菊酯的杀虫活力是消旋烯丙菊酯的4倍。因此，开发制备(S)-HMPC具有重要意义。 本文从土壤中分离得到250株菌株，经过反复筛选，从中挑选出一株能够高选择性水解(R)-乙酸烯丙醇酮酯的菌株C61。经过生理生化实验鉴定该菌株为花园芽孢杆菌。对C61进行培养条件优化，得到产酶的最佳培养基组成为：黄豆饼17.8g/l，橄榄油10.2g/l，(NH4)2SO4 2g/l，K2HPO4 1.78g/l，NaCl 1g/l，MgSO4 0.2g/l，pH 7.0。最佳培养条件为：种龄为18h，接种量为10％，培养温度为30℃，初始pH为8.0，装液量为5％，培养时间为24h。经过上述优化后，酶产量由最初的94U/l提高到了585U/l，提高了约5倍。通过转化条件优化得到最佳反应条件为：温度30℃，pH为8.5，摇床转速为240rpm，E值由44提高到了70。最后考察了不同底物浓度下酶反应过程曲线。如果要获得高光学纯度的(R)-烯丙醇酮，在底物浓度45mmol/l，转化率为37％，此时eep可达96％；在底物浓度180mmol/l，转化率达到53％时，ees可达95％，此时可得到高光学纯度的(S)-乙酸烯丙醇酮酯，收率为47％。

目录

文摘

英文文摘

第一章文献综述

第二章乙酸烯丙醇酮酯水解酶产生菌的筛选及鉴定

第三章培养条件及转化条件优化

3.1材料与方法

3.2结果与讨论

3.3小结

第四章结论与建议

参考文献

附录

致谢