双生病毒卫星DNA编码的βC1基因的原核表达、单克隆抗体制备及细胞定位

摘要

本文对双生病毒卫星DNA编码的βC1基因的原核表达、单克隆抗体制备及细胞定位进行了研究。文章利用原核表达载体pET-30a和pET-32a在大肠杆菌中分别表达了与中国番茄黄化曲叶病毒Y10分离物和烟草曲茎病毒Y35分离物相伴随的DNAβ分子的βC1基因，用Ni<'2+>-NTA树脂亲和纯化了重组蛋白Y10 βC1和Y35βC1。分别以重组蛋白为抗原免疫。BALB/c小鼠，用杂交瘤细胞技术制备了6株能够稳定传代并分泌抗Y10βC1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，各单抗腹水的间接ELISA效价在1：16000～1：128000之间，获得9株分泌抗Y35 βC1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，各单抗腹水的间接ELISA效价在1：128000～1：1024000之间。

目录

文摘

英文文摘

致谢

第一章文献综述

一单克隆抗体及其在植物病毒学中的应用

1抗体的基本结构和特性

2单克隆抗体制备技术

3单克隆抗体在植物病毒学中的应用

4植物病毒学中常用的免疫检测方法

二双生病毒的研究进展

1双生病毒的分类、基因组结构及寄主范围

2双生病毒的复制与转录

3 DNAβ的发现和它在双生病毒致病性中的作用

第二章材料与方法

1材料

1.1植物材料

1.2菌株和质粒

1.3试剂与仪器

1.4常用缓冲液的配制

2方法

2.1 PCR技术

2.2 PCR产物纯化

2.3 DNA克隆技术

2.4重组质粒的提取与鉴定

2.5外源基因在大肠杆菌中的表达及蛋白纯化

2.6多克隆与单克隆抗体的制备及检测方法

第三章研究内容

1前言

2材料和方法

1.1菌株、质粒、毒源、植物材料及试剂

2.2 DNAβ分子βC1基因的克隆和原核表达载体构建

2.3诱导表达和蛋白纯化

2.4重组蛋白的鉴定

2.5抗βC1蛋白的单克隆抗体制备

2.6间接ELISA

2.7单隆抗体的效价测定

2.8检测灵敏度测定

2.9 Western blot印迹分析

2.10三抗体夹心ELISA检测发病植物中的βC1蛋白

2.11 Y10 βC1、Y35 βC1蛋白的免疫胶体金标记

3结果

3.1 TYLCCNV-Y10和TbCSV-Y35卫星DNAβ分子βC1基因在大肠杆菌中的表达

3.2 Y10 βC1和Y35 βC1的单克隆抗体制备

3.3 Y10 βC1、Y35 βC1蛋白的免疫胶体金标记

4讨论

参考文献

附录