扬子鳄MHCⅡ类基因的位点分离与多态性检测

摘要

扬子鳄(Alligator sinensis)是中国特有的爬行动物,目前是我国一级珍稀保护动物。历史上曾广泛分布在长江、黄河流域。由于气候环境,人为影响等多种因素,野生扬子鳄的数量急剧下降,现在已濒临灭绝的边缘。上世纪七八十年代我国先后在安徽宣城和浙江长兴等地建立了扬子鳄自然保护区和扬子鳄养殖基地,时至今日虽然在圈养种群的数量上达到相当可观的数目,但由于圈养种群的先天不足和后天管理不当,其种群生存能力不容乐观。 主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)是脊椎动物中发现的编码免疫球蛋白样受体的高度多态的基因群,并且其某些基因型与生物体抗病能力存在一定的关联。由于MHC基因具有很高的多态性,尤其是Ⅱ类基因,可将MHC位点作为一种遗传标记,用于种群遗传结构和变异性的研究,这对于一些濒危物种的遗传保护起到重要的作用。 本文选取扬子鳄的MHC Ⅱ类基因为研究对象。通过一系列的方法分离出了扬子鳄MHC Ⅱ类a链基因第二外显子的一个位点(暂命名为a1)和β链基因第二外显子的4个位点(暂命名为β1-β4,其中β4位点为假基因)。然后利用获得的位点序列设计和筛选出可用于扬子鳄群体检测的引物三对,分别用于检测a1、β1、β2、这三个位点的群体多态性情况。然后利用这三对引物对从浙江长兴扬子鳄养殖基地采得49只扬子鳄个体和10只美国扬子鳄个体的基因组DNA用PCR-SSCP的方法进行群体检测,结果发现三个被检测的位点在所有个体里都呈现出单态带型,没有多态性现象的出现。这说明扬子鳄种群在经历了瓶颈效应之后其MHC的遗传多样性已经十分稀少,有必要对现有扬子鳄种群实施一些有针对性的保护和管理措施,以防止其遗传多样性的进一步降低,并有目的加强不同地域的扬子鳄之间的基因交流,以增加其种群遗传多样性。

目录

文摘

英文文摘

声明

致谢

第一部分文献综述

第一章扬子鳄研究综述

第一节扬子鳄的形态和分布

第二节扬子鳄的资源价值

第三节扬子鳄研究现状

第二章MHC研究概述

第一节MHC的结构和功能

第二节MHC的多态性

第三节MHC在分子遗传学和保护遗传中的应用

第四节SSCP在MHC研究中的应用

第三章本研究的立项依据和目的

第二部分实验内容

第四章样品材料

第一节实验样品

第二节实验试剂与设备

第五章实验路线和方法

第一节扬子鳄MHC Ⅱ类基因位点的分离

第二节扬子鳄MHC Ⅱ类基因位点的多态性检测

第三节实验中的技术步骤

第三部分实验结果与讨论

第六章实验结果

第一节位点分离过程中的实验结果

第二节位点群体检测的结果

第七章实验数据的分析与讨论

第一节实验数据的分析

第二节保护建议和研究展望

参考文献

作者简历