家蚕免疫相关基因Hdd1和Hdd2功能研究

摘要

抑制性差减杂交的方法发现当家蚕被细菌侵染时一些相关基因在家蚕体内的表达明显上调。Hdd1和Hdd2基因被发现在家蚕被细菌侵染时受到了诱导表达，对此进行了免疫相关方面的研究。通过对Hdd1和Hdd2基因的序列分析我们认为Hdd1和Hdd2基因可能是与家蚕免疫反应相关的基因。对克隆得到的Hdd1和Hdd2基因分别构建了Hdd1和Hdd2大肠杆菌原核表达载体，并构建了Hdd1基因杆状病毒真核表达载体，成功实现了Hdd1和Hdd2基因在体外的表达，并且用原核表达产物制备了Hdd1和Hdd2基因的多克隆抗体。原核表达产物均无活性，而真核表达产物可用于蛋白功能的进一步研究。
　　 在24小时内对家蚕两次注射Hdd1和Hdd2基因的双链RNA，然后分别注射灭活的两种细菌：E.coli K12和Bacillus subtilis。6小时后解剖经注射的家蚕幼虫。通过家蚕血淋巴的结节包被细胞免疫反应基础上来探讨Hdd1和Hdd2基因在家蚕免疫过程中的功能。经细菌E.coli K12和Bacillus subtilis注射诱导后的家蚕体内均有结节包被的产生，而在注射了Bacillus subtilis的家蚕幼虫体内结节反应比注射了E.coli K12的家蚕更加强烈。经Hdd1和Hdd2基因双链RNA诱导沉默处理的家蚕幼虫血淋巴形成的结节少于未经处理的对照组和注射了双链GFP基因的阴性对照组。对家蚕体内Hdd1和Hdd2基因实时荧光定量PCR的检测结果表明经双链RNA处理的实验组Hdd1和Hdd2基因的表达受到了明显抑制。据此认为，Hdd基因是家蚕细胞免疫反应结节包被过程中的功能基因。

目录

文摘

英文文摘

声明

第Ⅰ部分文献综述

第一章家蚕及昆虫免疫系统研究概述

1昆虫免疫的物理防线

2昆虫天然免疫识别机制

3体液免疫

4细胞免疫

第二章RNAi技术在昆虫方面的研究进展

1目的基因双链RNA的导入方法

2 RNAi在昆虫基因功能研究中的应用

3 RNAi在害虫防治领域中的应用

第Ⅱ部分 主要研究内容和技术路线

第三章研究内容和技术路线

第Ⅲ部分研究内容

第四章家蚕Hdd1和Hdd2基因的序列分析

1.材料与方法

2结果与分析

3讨论

第五章Hdd1和Hdd2基因的原核表达及多克隆抗体的制备

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第六章Hdd1基因在Bac to Bac系统中的表达

1材料与方法

2结果和分析

3.讨论

第七章Hdd1和Hdd2基因的RNAi分析

1.材料与方法

2.结果

3讨论

第Ⅳ部分 总结

本研究的创新点

参考文献

致谢