激素受体与HER2在乳腺癌不同制片技术中的表达水平比较及其临床意义研究

摘要

目的:
　　 雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)在乳腺癌的形成、发展和对激素反应中起关键作用。ER或PR阳性的乳腺癌病例均可采用内分泌治疗。HER2基因表达的蛋白c-erbB-2作为乳腺癌的预后指标、治疗反应预测指标和治疗靶点起作用,抗HER2单克隆抗体Herceptin治疗乳腺癌被广泛应用,明显地延长乳腺癌患者的生存时间和改善生活质量。由于内分泌治疗和新辅助化疗的出现和广泛应用,以及化疗后激素受体的表达水平可能与化疗前不一致,所以术前检测乳腺癌ER、PR的表达水平显得更为重要。细针穿刺细胞学检查对于乳腺癌术前诊断是一项简单而实用的检查项目,可用于检测ER、PR和c-erbB-2表达。但由于细胞学制片技术的原因,其检测结果尚不十分稳定,尤其是不利于同时检测多个抗体。
　　 雄激素受体(AR)在前列腺癌中的研究较多,但在乳腺癌中的生物学作用一直是临床上和基础研究中被忽略的领域。AR在乳腺癌中表达的临床意义尚无肯定的结论。AR的表达水平是否与乳腺癌的生物学行为有关,AR与ER、PR和c-erbB-2之间的表达是否存在相关性,AR在不同乳腺癌分子分型中的表达水平是否存在差别等问题,目前尚无满意的答案。
　　 本文旨在改进传统免疫细胞化学制片方法,提高乳腺癌术前ER、PR和c-erbB-2检测结果的可靠性;采用组织芯片技术检测乳腺癌AR的表达水平并探讨其临床意义。
　　 方法:
　　 对50例乳腺癌病例进行细针穿刺细胞学检查,检查前签署知情同意书,穿刺获得细胞学标本后分别进行传统涂片和液基细胞制片,然后进行免疫细胞化学染色,并对手术后的标本进行免疫组化染色,分别比较ER、PR和c-erbB-2在不同制片方法中的表达水平。液基细胞学制片采用利普液基细胞学产品,免疫组化制片采用SP法。
　　 采用组织芯片技术把200例乳腺癌手术标本制成二个组织芯片,每个组织芯片包含100个乳腺癌位点,采用免疫组化法En Vision法分别检测每个乳腺癌组织芯片中AR、ER、PR和c-erbB-2的表达水平,分析AR与乳腺癌临床病理指标的关系以及AR与ER、PR、c-erbB-2和乳腺癌分子分型的关系。
　　 AR、ER、PR免疫组化染色结果判断采用半定量法,≥10％细胞核着色视为阳性反应。根据染色强度分为阴性、弱阳性、中等阳性和强阳性,相应评分为0、1、2和3分。观察每张切(涂)片中阳性细胞百分数。阳性细胞百分数与阳性强度的乘积即为免疫反应得分,范围为0-300分。免疫反应得分10分以上视为阳性反应。按照乳腺癌HER2检测指南,c-erbB-2蛋白的评分0、1+视为阴性,3+视为阳性,2+进行FISH检测,阳性信号和对照信号的比值大于2.2视为HER2基因扩增。
　　 ER和PR在液基细胞涂片、传统涂片和组织切片中的阳性表达率的比较采用X2检验,AR与乳腺癌临床病理学指标的关系以及与乳腺癌分子分型的关系采用X2检验,c-erbB-2在液基细胞涂片、传统涂片和组织切片中的表达水平的差异用Kruskal-Wallis秩和检验,P＜0.05具有统计学意义。
　　 结果:
　　 在液基细胞涂片中肿瘤细胞呈散在或弥漫分布,背景清晰,易于观察和判断。在传统细胞涂片中肿瘤细胞呈团块状或成片分布,背景中充满大量红细胞和坏死物等引起的非特异性着色,对观察和判断造成一定的干扰。液基细胞涂片、传统涂片和石蜡切片的ER阳性表达率分别为54％(27/50)、50％(25/50)和56％(28/50),PR的表达率分别为44％(22/50)、38％(19/50)和52％(26/50),c-erbB-2中等强度以上阳性表达率分别为58％(29/50)、54％(27/50)和52(26/50)。ER、PR和c-erbB-2在三种制片方法的乳腺癌细胞中的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 乳腺癌AR的阳性表达率为64.5％(129/200),AR在乳腺癌中的表达与年龄、月经状况、肿瘤部位、淋巴结转移、肿瘤组织学类型、肿瘤TNM分期、是否浸润以及原位癌级别无明显相关性(P＞0.05),而与肿瘤体积和浸润性癌的组织学分级有关(P＜0.05)。多数ER和PR阳性的肿瘤同时也表达AR,114例ER阳性的病例中有99例(86.84％)AR也呈阳性表达,90例PR阳性的病例中77例(85.56％)AR阳性表达。AR的表达与ER和PR呈明显的相关性(P＜0.05)。AR在不同分子分型的乳腺癌中的表达率不同,在腺管A型和腺管A-HER2型中的表达率最高,腺管B型和腺管B-HER2型次之,而在HER2型和三阴性中最低(P＜0.05)。
　　 结论:
　　 1.液基细胞制片法的制片质量优于传统细胞涂片法,完整细胞数较多,背景干扰较少。
　　 2.液基细胞制片法的乳腺癌细胞ER、PR和c-erbB-2染色质量优于传统细胞涂片法,有利于结果判断。
　　 3.AR在乳腺癌中的表达水平与乳腺癌的分子分型有关,AR在腺管A型中的表达水平最高。
　　 4.乳腺癌AR的表达水平与肿瘤体积和组织学分级有关。

目录

文摘

英文文摘

致谢

1 引言

2 研究对象与试剂

2.1 研究对象

2.2 试剂

2.3 主要仪器设各

3 研究方法

3.1 穿刺细胞学标本的获取

3.2 液基细胞学制片

3.3 组织芯片制作

3.4 免疫组织化学染色与免疫细胞化学染色

3.4.1 免疫组化S-P法操作步骤

3.4.2 免疫组化En Vision法操作步骤

3.4.3 免疫细胞化学染色步骤

3.5 判断标准

3.6 统计学分析

4 结果

4.1 ER、PR和c-erbB-2在不同制片方法中的表达

4.1.1 ER在不同制片方法中的表达

4.1.2 PR在不同制片方法中的表达

4.1.3 c-erbB-2在不同制片方法中的表达

4.1.4 不同制片方法的染色背景比较

4.1.5 不同制片方法的试剂用量比较

4.2 AR在乳腺癌中的表达

4.2.1 AR与乳腺癌临床病理学指标的关系

4.2.2 AR与ER、PR和c-erbB-2的关系

4.2.3 AR在不同乳腺癌分子分型中的表达

5 讨论

5.1 ER、PR和c-erbB-2在不同制片方法中的表达

5.1.1 细针穿刺细胞学检查在乳腺癌的术前诊断中的应用

5.1.2 乳腺癌针吸标本中ER、PR和c-erbB-2的传统检测方法

5.1.3 液基细胞制片技术在术前检测乳腺癌ER、PR和c-erbB-2中应用

5.1.4 ER、PR和c-erbB-2在不同制片方法中的表达

5.1.5 免疫细胞化学检测乳腺癌ER、PR和c-erbB-2存在的问题

5.1.6 小结

5.2 AR在乳腺癌中的表达及意义

5.2.1 AR与乳腺癌临床病理指标的关系

5.2.2 AR与ER、PR和c-erbB-2的关系

5.2.3 AR与乳腺癌分子分型的关系

5.2.4 小结

6 结论

参考文献

综述一:雌孕激素受体与乳腺癌的关系

综述二:HER2与乳腺癌的关系

综述三:细针穿刺细胞学的研究进展

作者简历和已发表论文