基于系统毒理学的对乙酰氨基酚致肝损伤的个体易感生物标志物研究

摘要

对乙酰氨基酚(Acetaminophen，APAP)导致的肝损伤具有明显的个体易感性，寻找其个体易感标志物对提高其用药安全性具有重要意义。本文分别采用毒理基因组学和毒理代谢组学技术，分析给药前敏感组和耐受组大鼠的基因表达谱和代谢物谱差异，寻找其肝损伤的个体易感标志物并验证。 1.对大鼠给药前的外周血进行总RNA提取和表达谱芯片检测，对表达谱芯片数据进行整合分析筛选出30个基因作为潜在的APAP致肝损伤的个体易感标志基因。采用一批新的大鼠，对候选标志基因进行实时定量荧光PCR验证，结果表明Incenp、Rpgrip1、Hapln2、Cxadr这4个基因先天表达量低的大鼠对APAP致肝损伤敏感，这4个基因可能为APAP致肝损伤的基因标志物。 2.收集大鼠给药前的尿液，气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对样本内源性代谢物进行分析，SPSS软件对敏感组和耐受组大鼠代谢组数据进行处理，筛选出潜在的对APAP致肝损伤敏感的代谢标志物。采用一批新的大鼠获取样本，基于GC-MS和生物信息学技术对候选代谢标志物进行验证，结果表明丙二酸、L-苏氨酸、3，4-二羟基丁酸、L-甲硫氨酸、甘氨酸、半乳糖、尿苷、β-D-吡喃葡萄糖苷可能为APAP致肝损伤代谢标志物。 以上研究表明，大鼠给药前的基因表达和代谢物含量与APAP致肝损伤的个体易感有关，可作为其生物标志物。这一研究思路可以拓展到其他的肝毒性化合物和物种，为预测化合物致肝毒的个体易感性提供了新的方法学指导。

目录

声明

致谢

摘要

1 绪论

1．1 特异质肝损伤

1．1．1 特异质肝损伤慨况

1．1．2 特异质肝损伤的影响因素

1．1．3 特异质肝损伤的预测

1．2 毒理基因组学和代谢组学

1．2．1 毒理基因组学概念

1．2．2 毒理基因组学在特异质肝损伤预测上的应用

1．2．3 代谢组学概念

1．2．4 代谢组学在特异质肝损伤预测上的应用

1．3 本文研究内容

2 APAP致大鼠肝损伤个体易感生物标志物筛选

2．1 引言

2．2 实验材料和方法

2．2．1 试剂和仪器

2．2．2 动物实验与样本收集

2．2．3 给药前后血清生化指标检测

2．2．4 给药后肝脏组织病理切片检查

2．2．5 基因表达分析与个体易感基因筛选

2．2．6 尿液代谢组学分析与个体易感代谢物筛选

2．3 结果与讨论

2．3．1 血清生化指标和组织病理学现象

2．3．2 潜在个体易感基因标志物筛选

2．3．3 潜在个体易感代谢标志物筛选

3 个体易感基因标志物验证

3．1 引言

3．2 实验材料与方法

3．2．1 试剂和仪器

3．2．2 RNA的提取和纯化

3．2．3 RNA逆转录及实时定量PCR实验

3．3 结果与讨论

3．3．1 RNA的提取和纯化

3．3．2 基因验证分析

3．3．3 APAP致大鼠肝损伤个体易感基因标志物的预测

3．3．4 讨论

4 个体易感代谢标志物验证

4．1 引言

4．2 实验材料与方法

4．2．1 试剂和仪器

4．2．2 尿液样本的收集

4．2．3 尿液样本的分析

4．2．4 潜在代谢标志物的验证

4．3 结果与讨论

4．3．1 潜在的标志代谢物验证结果

4．3．2 讨论

5 总结与讨论

参考文献

作者简历