铁皮石斛根中石斛多糖提取优化及抗氧化活性研究

摘要

铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindl)是我国传统名贵中药材，其药用价值为人们所共识。多糖是石斛属植物的主要活性成分。目前，铁皮石斛主要开发利用部位是其占植株主要组成的茎干部位，而对铁皮石斛根则较少利用。鉴于铁皮石斛属于名贵中药材，资源比较短缺，因此认为，对其根部的多糖进行深入的研究探讨非常具有意义，可为铁皮石斛资源的全面生产与使用提供依据。 本文以铁皮石斛根部的石斛多糖为研究对象，对铁皮石斛多糖进行了提取分析测定，并采用响应面设计法对石斛根部多糖的提取工艺进行优化研究，优选提取温度、提取时间和药液比等影响提取工艺的主要参数，得到铁皮石斛多糖提取的最优条件为:药液比1∶14，提取温度为100℃，提取时间为50min。在此条件下，理论计算提取率为6.10％，实际提取率达到6.05％，与模型高度拟合。 用优化的水提法条件从铁皮石斛根中提取石斛多糖，得率为10.3％，通过乙醇沉淀多糖，Sevag法除蛋白等一系列操作得到三级沉淀多糖，分别为CK-1、CK-2、CK-3，得率分别是3.95％、1.42％和2.04％。 对提取的石斛多糖CK-1、CK-2、CK-3进行了抗氧化活性的测定，包含四个抗氧化体系，分别是超氧阴离子清除率、DPPH自由基清除率羟基、自由基清除率、Fe2+螯合清除能力。检测结果显示:粗多糖浓度一定时，对于超氧阴离子清除能力，抗氧化能力最强的是CK-2，清除率达到了66％(3.2mg/ml); DPPH自由基清除率最高的是CK-3、达到了79％(2.0mg/ml);羟基自由基清除能力最高的是CK-1，其清除率达到了73％(2.0mg/ml); Fe2+螯合清除能力最强的也是CK-1，其螯合率达到了88％(2.0mg/ml)。由此表明，多糖对超氧阴离子自由基、DPPH自由基、羟基自由基、亚铁离子均有较显著的清除作用，且其呈现一定的量效关系，表明铁皮石斛多糖具有较好的抗氧化作用。因此，本文研究可为铁皮石斛根的深入开发利用奠定基础。

目录

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致谢

摘要

缩略词表

1．引言

1．1 本课题研究目的、意义

1．2 主要研究内容

1．2．1 石斛多糖的提取测定

1．2．2 石斛多糖的纯化制备

1．2．3 石斛多糖的抗氧化活性检测

2．铁皮石斛多糖的提取测定

2．1 实验器材

2．1．1 仪器设备

2．1．2 原材料处理

2．1．3 实验试剂

2．2 石斛多糖的提取及含量测定

2．2．1 对照品溶液的制备

2．2．2 标准曲线的测定

2．2．3 石斛脱脂

2．2．4 多糖含量测定

2．3 响应面法优化石斛多糖提取工艺

2．3．1 水提法的单因素试验考察

2．3．2 水提法的响应面法优化试验方案与结果

2．3．3 响应曲面与等高线分析

2．4 验证试验

2．5 本章小结

3．石斛多糖的纯化制备

3．1 实验器材

3．1．1 仪器设备

3．1．2 材料及试剂

3．2 实验方法和结果

3．2．1 粗多糖提取制备

3．2．2 Sevag法除蛋白

3．2．3 粗多糖分级沉淀

3．2．4 多糖的得率和纯度测定

3．3 蛋白残留量检测

3．3．1．蛋白残留量标准曲线

3．3．2 分级多糖的蛋白残留量检测

3．4 本章小结

4．石斛多糖抗氧化活性检测

4．1 实验器材

4．1．1 主要仪器和设备

4．1．2 样品制备

4．1．3 实验试剂

4．2 实验方法与结果

4．2．1 超氧阴离子清除率的测定

4．2．2 DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基清除率的测定

4．2．3 羟基自由基的清除率的测定

4．2．4 亚铁离子螯合能力测定

4．3 本章小结

5．总结与展望

5．1 总结

5．2 展望

参考文献

综述 铁皮石斛及石斛多糖研究的相关进展

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