奶牛消化道内肽结合氨基酸的数量分布及其转运载体表达的研究

摘要

十二指肠作为非肠系膜系统的成员之一，也属于小肠的组成部分之一，其生成和吸收SNAN的能力对乳蛋白前体物的生成至关重要。至今，还没有将瘤胃、瓣胃和十二指肠对小肽和游离氨基酸的生成和吸收能力进行比较的试验研究。为此，本文针对瘤胃、瓣胃和十二指肠内的FAA-N和PBAA-N的含量及各部位粘膜上皮的APN、FAA转运载体和小肽转运载体PepT1的相对表达量进行了研究，初步阐明了乳蛋白前体物生成和吸收的主要部位。主要试验结果如下:
　　试验一:为探索瘤胃、瓣胃和十二指肠中肽结合氨基酸和游离氨基酸浓度的分布。本试验将6头荷斯坦泌乳奶牛作为试验对象，采取瘤胃、瓣胃和十二指肠内的食糜经离心预处理为澄清液体后，用氨基酸自动分析仪测定6N HCl水解前后的游离氨基酸(FAA)和总氨基酸浓度。试验结果为，除了脯氨酸在瘤胃、瓣胃和十二指肠内的差异不显著外(P＞0.05)，其余FAA-N均为十二指肠中的浓度显著高于瘤胃和瓣胃中的浓度(P＜0.01)。所有FAA-N在瘤胃内的浓度均略低于在瓣胃内的浓度。肽结合苯丙氨酸、肽结合组氨酸在瘤胃、瓣胃和十二指肠内的浓度差异不显著(P＞0.05)，其余PBAA-N在十二指肠内的浓度显著高于瘤胃、瓣胃(P＜0.01)。瓣胃内PBAA-N均略高于瘤胃内的浓度，且显著低于十二指肠内的浓度(P＜0.01)。试验结果表明，FAA-N和PBAA-N在瘤胃和瓣胃内的浓度显著低于其各自在十二指肠内的浓度，说明FAA-N和PBAA-N在十二指肠中的生成量较高。
　　试验二:为探索瘤胃、瓣胃和十二指肠中小肽和游离氨基酸吸收的主要部位，本试验将6头荷斯坦泌乳奶牛作为试验对象，采取瘤胃、瓣胃和十二指肠粘膜上皮组织，提取mRNA后应用实时荧光定量PCR测定氨基肽酶N(APN)、氨基酸转运载体（ASCT2、y+LAT1、ATB0,+）和小肽转运载体PepT1的表达量。设计适合奶牛的APN、FAA转运载体的引物并检验其扩增效率，引用已经设计并验证过的PepT1载体引物。应用实时荧光定量PCR仪测定各基因的相对表达量。APN、FAA转运载体经验证扩增效率依次为，其可以用于实时荧光定量检测基因的相对表达量。除了APN在瘤胃的表达量显著高于瓣胃和十二指肠外(P＜0.05)，ASCT2、y+LAT1、ATB0,+的表达量均为十二指肠显著高于瘤胃和瓣胃(P＜0.05)。PepT1的表达量从瘤胃到十二指肠依次升高，且十二指肠的表达量显著高于瘤胃和瓣胃的表达量(P＜0.05)。试验结果表明，在小肽的降解过程中，相比于十二指肠和瓣胃，瘤胃上皮细胞的APN降解能力可能更强;而氨基酸和小肽吸收和转运的主要部位可能在十二指肠，其次在瓣胃。由此可以推断，十二指肠可能是游离氨基酸和肽结合氨基酸的主要吸收部位。

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缩略词

摘要

第一章 文献综述

第一节 小肽对反刍动物的营养与生理作用

1 小肽对反刍动物的营养作用

2 小肽对反刍动物的生理作用

第二节 反刍动物消化道不同部位小肽的来源、吸收及其影响因素

1 反刍动物消化道不同部位小肽的来源及其影响因素

2 反刍动物消化道不同部位对小肽的吸收

第三节 氨基酸及小肽在消化道内的吸收机制及其影响因素

1 氨基酸在消化道内的吸收机制及其影响因素

2 小肽在消化道内的吸收机制及其影响因素

第四节 氨基肽酶N、游离氨基酸转运载体及小肽转运载体

1 氨基肽酶N

2 氨基酸转运载体

3 小肽转运载体

第五节 本研究的目的与内容

第二章 奶牛消化道不同部位游离氨基酸及肽结合氨基酸的含量(试验一)

第一节 材料与方法

第二节 结果与分析

第三节 讨论

第四节 小结

第三章 奶牛消化道不同部位小肽和氨基酸转运载体的基因表达量(试验二)

第一节 材料与方法

第二节 结果与分析

第三节 讨论

第四节 小结

第四章 综合讨论

1 奶牛消化道不同部位肽结合形式氨基酸和游离氨基酸含量差异

2 奶牛消化道不同部位APN、FAA转运载体和PepT1表达量差异

第五章 结论、创新点和后续展望

1 结论

2 创新点

3 后续研究展望

参考文献

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