蜂王浆主蛋白(MRJPs)超滤分离及重组抗菌肽Royalisin利用技术研究

摘要

蜂王浆是由蜜蜂工蜂咽下腺、上颚腺和脑后腺等腺体（王浆腺）分泌的乳状物质，是1～3日龄工蜂幼虫及蜂王的终生食料，它含有丰富的生物活性成分，具有多种生理活性和营养保健功能。近年来，蜂王浆蛋白，尤其是王浆主蛋白(MRJPs)逐渐成为新的研究热点。本文主要开展了蜂王浆的主要功能蛋白—MRJPs和抗菌肽royalisin的分离、生物活性检测及应用研究。主要结果如下:
　　一、重组royalisin发酵与ELISA定量检测
　　为充分利用重组抗菌肽royalisin，用royalisin多克隆抗体建立了royalisin的ELISA快速检测方法，并将该方法用于测定不同培养温度下royalisin的产量，获得最佳培养温度。结果表明:在27℃条件下，得率为3.01mg/L，大于实验窒之前产率（1.5mg/L）。为进一步发酵生产提供了重要依据。
　　将不同蜂种的血淋巴、蜂王浆冻干粉作为抗原，用建立的ELISA方法检测样品吸光度，代入所建回归方程，计算得到各样品中的royalisin的量。证实中华蜜蜂的抗病性（即royalisin含量）强（多）于意蜂。
　　二、用MRJP1多克隆抗体ELISA快速检测蜂王浆新鲜度
　　建立了以MRJP1多克隆抗体为一抗的ELISA快速检测蜂王浆新鲜度的方法。将鲜王浆放入40℃恒温箱，分别在0、7、14、21、28、35、42和49天取样用ELISA法检测MRJP1含量。结果证明，MRJP1在储存中明显降解。同时通过SDS-PAGE分析进行了验证。
　　三、蜂王浆中MRJPs的超滤分离
　　以MRJPs提取率为考核指标，分别考察pH、离子强度和水料比三个单因素对MRJPs提取率的影响;然后通过进行4因素3水平正交试验和统计，获得最佳工艺参数;最后进行最佳工艺验证，产物冻干粉MRJPs蛋白鉴定，测定副产物中总糖和王浆酸(10-HDA)的回收利用率。测得在最优条件，即:水料比5∶1(mL/g)，离子强度0.5(mol/L)，pH7，MRJPs提取率为82.63％。且此时滤后液的总糖和10-HDA的回收利用率分别为3.66％和2.11％。

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致谢

摘要

第Ⅰ部分 文献综述

1．1 蜂王浆蛋白家族(MRJPs)的种类及生物活性

1．1．1 蜂王浆主蛋白(MRJPs)种类

1．1．2 MRJPs生物活性

1．1．3 MRJPs的生理功能

1．2 抗菌肽

1．2．2 蜜蜂及蜂王浆来源的抗菌肽

1．2．3 抗菌肽的发展前景

1．3．1 蜂王浆中10-HDA提取

1．3．2 蜂王浆中MRJPs提取

1．4 超滤技术

1．4．1 超滤技术应用于水处理领域

1．4．2 超滤技术在蛋白纯化中的进展

1．4．3 超滤技术的应用前景与难题

第Ⅱ部分 研究目的、意义和技术路线

第二章 研究的目的、意义及技术路线

1．目的和意义

2．研究内容

3．技术路线

第Ⅲ部分 研究内容

第三章 重组royalisin发酵分离与ELISA定量检测

3．1 实验试剂和设备

3．2 实验方法

3．3 实验结果与讨论

3．4 本章小结

第四章 中华蜜蜂和意大利蜜蜂血淋巴中抗菌肽royalisin的ELISA测定

4．1 实验材料、试剂和设备

4．2 蜜蜂的取样、免疫处理和血淋巴提取

4．3 用royalisin多克隆抗体测定中蜂和意蜂血淋巴中的抗菌肽含量

4．4 试验数据统计及分析

4．5 结果与讨论

4．6 结果与讨论

第五章 王浆新鲜度标志物MRJP-1的ELISA检测

5．1 实验材料、试剂和设备

5．2 蜂王浆温度降解处理实验方法

5．3 实验结果鉴定

5．4 试验数据统计及分析

5．5 结果与讨论

5．6 本章小结

第六章 鲜王浆中MRJPs的超滤分离

6．1 实验材料、试剂和设备

6．2 超滤装置基本工作原理

6．3 工艺流程

6．4 实验方法

6．5 数据统计及分析

6．6 试验结果

6．7 本章小结

参考文献

作者简介及科研成果