2013-2015年中国部分地区猪圆环病毒2型分子流行病学调查及猪源IFI35单抗的制备

摘要

猪是PCV的天然宿主，在许多国家PCV2感染给养猪业造成的严重经济损失，有关PCV2病原体的研究一直受到人们广泛的关注。
　　本文基于实验室已有的PCV2检测方法的基础上，收集了2013-2015年间来自中国部分地区40个猪场96份疑似感染PCV2病料，从病料中检测到核酸阳性检出率为69.8％(28/40)，猪场的阳性检出率为70％(67/96)。根据邻接法构建了系统进化树进行序列分析，结果发现，中国部分地区流行的PCV2基因型为PCV2b和PCV2d，与全球PCV2流行趋势一致。将检测为阳性的病料在细胞上传代，共分离到五株病毒，HZXS1410为PCV2a，TY1303、HZXS1405、HZXS1411属于PCV2b，JHYW1503属于PCV2d。
　　干扰素(Interferons，IFNs)是哺乳动物抵御病毒入侵的第一道防线，干扰素的得名正是由于它能干扰病毒的复制。干扰素分泌后通过激活数百种干扰素诱导蛋白(IFN-induced proteins)和干扰素刺激基因(IFN-stimulated genes，ISGs)来实现抗病毒和诱发炎症反应等功能。IFI35是位于干扰素通路下游的蛋白（也称为IFP35），鉴定IFI35可以间接地表现出IFN在与病毒相互作用的水平。本人基于实验室已有的猪源IFI35基因，构建了PET28a-his-pig-IFI35载体，并在原核细胞中表达。并通过变性纯化制得重组蛋白，免疫小鼠脾脏与骨髓瘤细胞进行融合培养，筛选出4株可以稳定分泌的单抗细胞，命名为1E11、1G3、2E2、4G2。四株单抗的培养上清及小鼠腹水均可与原核和真核表达的猪源IFI35反应。制备IFI35的单抗用于本实验室今后对IFN调控病毒作用机制的研究。

目录

声明

论文说明

论文创新点

摘要

第一部分 文献综述

1 猪圆环病毒2型病原学

1．2 猪圆环病毒(PCV)的生物学特性

1．3 猪圆环病毒基因组及编码产物

1．4 猪圆环病毒基因分型

1．5 猪圆环病毒2型的流行病学

2 IFI35研究进展

2．1 干扰素的其分类

2．2 干扰素诱导蛋白的研究进展

2．3 IFI35的生物学特性

2．4 IFI35抗病毒作用研究进展

第二部分 研究内容

第一章 PCV2病毒的分离

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二章 猪IFI35蛋白的表达和纯化

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第三章 猪源IFI35单克隆抗体的制备及鉴定

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

全文总结

参考文献

附录

致谢