甲钴胺对Aβ25-35引起的神经细胞毒性的保护作用

摘要

目的： 阿尔茨海默症(Alzheimer's Diseases，AD)是最常见的和衰老相关的痴呆。目前世界人口逐渐老龄化，AD患者越来越多，然而却没有很好的药物，可以治愈AD。甲钴胺作为维生素B12在哺乳动物体内的活性形式之一，临床上用于治疗神经性疾病，并报道有维持老年人认知功能的效果。本实验的目的是研究甲钴胺对AD模型细胞的作用，观察其是否能减轻淀粉样蛋白(beta amyloid，Aβ)引起的神经毒性，以期对AD的治疗有所用。 方法： 采用25μM的Aβ25-35处理PC12神经细胞24h，建立AD细胞模型，考察4个不同浓度甲钴胺对细胞的保护作用。再通过检测细胞活力，细胞活性氧水平，线粒体钙浓度，线粒体膜电位，以及细胞凋亡和与此相关的基因，蛋白的变化，观察验证甲钴胺对Aβ25-35诱导的细胞毒性的保护作用。 结果： 不同浓度的甲钴胺都能增加因Aβ25-35毒性而降低的细胞活力，在1μM的时候效果最为明显;活性氧检测发现细胞经过Aβ25-35处理后，活性氧水平升高，在甲钴胺加入后，各个浓度都有明显下降;在Aβ25-35处理24h后，线粒体钙水平上升，细胞线粒体膜电位下降明显，而施加甲钴胺后，线粒体钙水平下降，线粒体膜电位回升;通过经典的AnnexinV/PI双染色检测细胞凋亡情况发现，在Aβ25-35处理24h后，细胞早期凋亡比例升高，而经甲钴胺处理后，凋亡的比例减少;通过qRT-PCR检测了mfn2，gsr,akt,bcl2,bax等mRNA表达，发现mfn2，gsr，akt的mRNA在Aβ25-35处理24h后，都有所降低，而甲钴胺回复了它们的水平，bax/bcl2的比值可以反映细胞的凋亡情况。在给予甲钴胺后，bax/bcl2的比值明显下降;而用Western blot检测cleaved Caspase-3，p-Akt，PGC-1α的蛋白水平，其中p-Akt在Aβ25-35处理表达下降，而cleaved Caspase-3表达上升，PGC-1α表达下降，给予甲钴胺后则改善这些变化。 结论： 实验结果表明，Aβ25-35可对细胞造成活性氧和钙水平升高，并降低线粒体膜电位，从而引起细胞凋亡。而甲钴胺可降低这些损伤以及后续的细胞凋亡比例，说明甲钴胺的确可以对这种神经毒性有缓解作用。

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论文说明

致谢

摘要

论文创新点

缩略词表

引言

实验仪器及材料

实验方法

3实时定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)

4流式细胞术和荧光显微镜检测线粒体膜电位、活性氧和细胞凋亡

5细胞活力和线粒体钙浓度检测

6数据分析

3实验结果

3．2甲钴胺降低Aβ25-35引起的细胞活性氧升高

3．3甲钴胺改善Aβ25-35引起的线粒体膜电位降低

3．4甲钴胺降低Aβ25-35引起的线粒体钙浓度升高

3．5甲钴胺降低Aβ25-35引起的细胞凋亡比例

4讨论

5小结

参考文献

综述 维生素B12对Aβ细胞毒性可能的作用

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