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致谢
摘要
缩略词表
1．绪论
1．1．肠激酶简介
1．1．1．肠激酶的结构特点
1．1．2．肠激酶的酶学特点
1．1．3．肠激酶的生理功能
1．1．4．肠激酶的基因工程研究进展
1．1．5．肠激酶活性检测方法概述
1．2．选题意义及研究内容
2．重组表达菌株的构建
2．1．引言
2．2．实验材料及实验设备
2．2．1．菌种及载体
2．2．2．试剂耗材
2．2．3．主要仪器及型号
2．2．4．溶液配制
2．3．实验方法
2．3．1．基因克隆及表达载体构建
2．3．2．感受态细胞制备与质粒转化
2．3．3．阳性克隆筛选与鉴定
2．4．结果与讨论
2．4．1．RNA提取质量分析
2．4．2．逆转录PCR产物电泳结果
2．4．3．阳性克隆菌株鉴定
2．5．总结
3．牛肠激酶轻链蛋白的表达与纯化
3．1．引言
3．2．实验材料及实验设备
3．2．1．菌种
3．2．2．试剂耗材
3．2．3．主要仪器及型号
3．2．4．实验溶液配制
3．3．实验方法
3．3．1．发酵表达工艺
3．3．2．纯化工艺
3．3．3．纯化产品检测
3．4．结果与讨论
3．4．1．蛋白的发酵表达
3．4．2．蛋白的复性与纯化
3．4．3．纯化结果
3．5．总结
4．活性检测方法研究
4．1．引言
4．2．实验材料及实验设备
4．2．1．试剂耗材
4．2．2．主要仪器及型号
4．2．3．实验溶液配制
4．3．实验方法
4．3．1．基于胰蛋白酶原和BAEE的方法
4．3．2．基于荧光底物的方法
4．3．3．荧光底物法反应条件筛选
4．3．4．荧光底物法方法学验证
4．4．结果与讨论
4．4．1．BAEE法结果
4．4．2．荧光底物法结果
4．4．3．荧光底物法反应条件筛选结果
4．4．4．荧光底物法方法学验证结果
4．4．5．电泳法结果
4．4．6．总结
5．结论
参考文献
