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致谢
摘要
缩写词表
第一章文献综述
1．1天然产物的生物合成研究进展
1．1．1天然产物的概述
1．1．2天然产物的生产方法
1．2天然香料的生物合成进展
1．2．1天然香料的概述
1．2．2天然香料的化学组成
1．2．3天然香料的生产方法
1．3鸢尾酮的研究进展
1．3．1鸢尾酮的概述
1．3．2鸢尾酮的理化性质
1．3．3鸢尾酮在植物体内的生物合成
1．3．4鸢尾酮的生产方法与现状
1．4鸢尾酮生物合成的新策略
1．4．1鸢尾酮合成新策略的可行性分析
1．4．2假紫罗兰酮的概述
1．4．3假紫罗兰酮的生产方法与现状
1．5本课题的研究内容及意义
第二章产鸢尾酮烟曲霉菌株的分离及发酵条件的优化
2．1前言
2．2实验材料
2．2．1仪器设备
2．2．2实验材料
2．2．3主要试剂
2．2．4培养基和培养条件
2．3实验方法
2．3．1真菌的分离及纯化
2．3．2 CTAB法提取霉菌DNA
2．3．3菌种鉴定
2．3．4鸢尾酮HPLC检测
2．3．5鸢尾酮分子确证
2．4实验结果与讨论
2．4．1真菌分离与鉴定
2．4．2目标菌株生物发酵产鸢尾酮的鉴定
2．4．3鸢尾酮构型的鉴定
2．4．4鸢尾酮生物发酵条件优化
2．4．5鸢尾酮构型的生物转化
2．5本章小结
3．1前言
3．2实验材料
3．2．1仪器设备
3．2．2菌株及质粒
3．2．3引物
3．2．4工具酶及主要试剂
3．2．5抗生素及培养基
3．3实验方法
3．3．1常规分子生物学实验
3．3．2 Gibson assembly快速构建质粒
3．3．3重组番茄红素菌株的培养及产物检测分析
3．3．4重组假紫罗兰酮大肠杆菌的培养及GC／MS检测分析
3．4结果与讨论
3．4．1番茄红素及假紫罗兰酮标准曲线的建立
3．4．2番茄红素合成途径染色体组的整合
3．4．3产假紫罗兰酮大肠杆菌的构建
3．4．4两相发酵法产假紫罗兰酮
3．4．5cmCCD1启动子的优化
3．4小结
第四章优化NADPH供应及MEP途径提高假紫罗兰酮产量
4．1前言
4．2实验材料
4．2．1菌株及质粒
4．2．2引物
4．2．3试剂及培养基
4．3实验方法
4．2．1常规分子生物学实验
4．2．2两步法无痕重组
4．4结果与讨论
4．4．1 E．coli EIB背景的优化
4．4．2 M1启动子库的构建
4．4．3组合调控NADPH的供应
4．4．4组合调控MEP途径
4．4．5基因改造提高菌株的稳定性
4．4．6摇瓶发酵条件的优化
4．4．7 cmCCD1切割位点对假紫罗兰酮转化率的影响
4．5小结
第五章鸢尾酮天然前体marnerol的生物合成研究
5．1前言
5．2材料
5．2．1菌种及质粒
5．2．2引物
5．2．3试剂和培养基配方
5．3方法
5．3．1常规分子生物学操作
5．3．2酿酒酵母电转感受态细胞的制备及转化
5．3．3重组marneral酿酒酵母的培养及干重测量
5．2．5 Marneral的衍生化及GC／MS鉴定
5．4结果与讨论
5．3．1 Marneral合成基因在酿酒酵母染色体的整合
5．3．3过表达MRN1及tHMG对marneral产量的影响
5．3．4MRN1及tHMG表达对marnerol产量的影响
5．5小结
第六章鸢尾酮前体的生物转化
6．1前言
6．2材料
6．2．1菌种
6．2．2试剂及培养基配方
6．3方法
6．3．1假紫罗兰酮的生物转化
6．3．2 Marneral的生物转化
6．3．3鸢尾酮的GC／MS鉴定
6．4结果与讨论
6．4．1假紫罗兰酮生物转化及鉴定
6．4．2 Marnerol的生物转化及鉴定
6．5小结
第七章结论与展望
7．1结论
7．2展望
参考文献
作者简历
