miR-455-5p对结直肠癌细胞生物学特性的影响及机制

摘要

目的： 1.研究miR-455-5p在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达及转染三株结直肠癌细胞后miR-455-5p表达水平的变化 2.探讨miR-455-5p对结直肠癌细胞增殖活性、细胞凋亡、细胞迁移等生物学功能的影响。 3.探讨miR-455-5p参与结直肠癌发生发展的机制，为结直肠癌的早期诊断、治疗提供潜在的生物学标志。 方法： 1.采用实时定量PCR检测在40对CRC组织及其对应癌旁组织中的miR-455-5p表达水平，同时检测三株结直肠癌细胞株（HCT-116、HT-29、SW-480）的表达情况； 2.将携带有miR-455-5p-模拟物（mimics）和miR-455-5p-抑制物（inhibitor）的脂质体复合物转染至三株CRC细胞后，分别采用BrdU法、流式细胞实验、划痕实验检测细胞增殖、凋亡及迁移能力； 3.通过靶基因预测软件来预测结直肠癌中miR-455-5p潜在的靶基因。采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法（Western blotting）和荧光素酶实验进一步验证miR-455-5p对靶基因PIK3R1的作用。 结果： 1.miR-455-5p在CRC组织中的表达量为（0.56±0.29），明显低于其在癌旁组织中的表达量（2.48±1.57）（P＜0.001）。临床病理因素分析结果显示，CRC组织中miR-455-5p的表达量与肿瘤分化有关（P＜0.05）； 2.miR-455-5p在三株结直肠癌细胞中表达良好，在miR-455-5p-mimics组中miR-455-5p表达量均上调，在miR-455-5p-inhibitors组中miR-455-5p表达量均下调； 3.与对照组相比，miR-455-5p-mimics组细胞的增殖活性均明显降低，而miR-455-5p-inhibitor组细胞的增殖活性均明显升高（P值均＜0.05）； miR-455-5p-mimics组细胞的凋亡率明显升高，而miR-455-5p-inhibitor组细胞凋亡率明显降低（P值均＜0.05）；在HT-29细胞中，过表达miR-455-5p可抑制细胞的迁移，而miR-455-5p-inhibitor组细胞的迁移能力明显增强（P值均＜0.05）； 4.通过生物信息学分析预测PIK3R1（p85α调节亚基基因PI3K）是miR-455-5p在结直肠癌中的一个潜在靶基因。过表达miR-455-5p能够降低PIK3R1mRNA及蛋白的表达水平，抑制miR-455-5p表达则会上调PIK3R1mRNA及蛋白的表达水平（P值均＜0.05），荧光素酶实验显示miR-455-5p能与PIK3R1基因的3’UTR结合。 结论： 1.miR-455-5p在CRC组织中低表达。 2.miR-455-5p在结直肠癌中可能起着抑癌基因的作用。 3.PIK3R1是miR-455-5p的一个潜在靶基因。

目录

声明

引言

第一部分：miR-455-5p在结直肠癌组织中的表达

材料与方法

一、病人及组织样品

二、主要试剂

三、主要仪器

四、主要液体

五、实验方法

结果与分析

（一）QPCR检测结直肠癌组织及癌旁组织中miR-455-5p的表达量

（二）结直肠癌组织中miR-455-5p的表达量与临床病理因素的关系

（三）QPCR检测人结直肠癌细胞株miR-455-5p表达水平

（四）转染结直肠癌细胞株

讨论

小结

第二部分 miR-455-5p对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

材料与方法

（一）材料

（二）实验方法

结果与分析

（一）miR-455-5p对结直肠癌细胞的影响

（二）miR-455-5p对结直肠癌细胞凋亡的影响

（三）流式细胞仪检测细胞凋亡的结果

（四）miR-455-5p对结直肠癌细胞迁移的影响

讨论

小结

第三部分miR-455-5p靶基因的预测及验证

材料与方法

（一）材料

（二）实验方法

结果与分析

1. 靶基因预测软件预测miR -455 -5p 靶基因

2. miR-455 -5p 靶基因的预测

3. Western blot结果

讨论

小结

参考文献

附录A

附录B

参考文献

在学研究成果

致谢