MiR-126在端粒功能障碍小鼠造血干细胞功能上的研究

摘要

本文对MiR-126在端粒功能障碍小鼠造血干细胞功能上进行了研究。microRNA是在真核生物中发现的内源性并且具有调控功能的非编码RNA，很多文献报道microRNA信号通路参与造血干细胞（HSC）的稳态维持和再生。但在端粒功能障碍小鼠模型中针对miRNA调控途径还没有相关的研究工作，利用已有的两种基因缺陷小鼠模型（miR-126条件敲除小鼠模型和端粒功能障碍小鼠模型）研究miR-126对HSC稳态维持和衰老的影响；并进一步确定miR-126在HSC中的靶基因。对于阐明miR-126参与 HSC衰老的分子机制有重要的科学意义。实验结果显示正常生理状态下miR-126条件敲除小鼠骨髓中的造血干细胞数目增多，髓系粒系祖细胞数目增多，脾脏变大，脾脏中造血干细胞（LSK）比例增加，进一步染色检测脾脏中髓系粒细胞比例增加。为了研究骨髓中造血干细胞数目增多的原因，对miR-126基因条件敲除小鼠造血干细胞细胞周期进行了分析，miR-126基因条件敲除小鼠造血干细胞G0期比例降低，而G1，S/G2/M比例升高。 Brdu实验结果显示：miR-126基因条件敲除小鼠与对照小鼠相比Brdu+比例升高。对小鼠全骨髓细胞中造血干细胞进行了凋亡的检测发现miR-126基因条件敲除小鼠的造血干细胞较对照凋亡细胞比例没有差异。证明骨髓中造血干细胞增多是由于G0期细胞减少的原因和细胞凋亡无关。Q-PCR检测WT和G3小鼠造血干细胞（LSK）中miR-126表达情况，发现G3小鼠造血干细胞中miR-126表达和WT相比出现明显下调，为了验证其表达下调的原因，在WT和G3小鼠造血干细胞中过表达miR-126，竞争性骨髓移植后每个月检测外周血嵌合率发现miR-126基因过表达使WT和G3小鼠的骨髓干细胞自我更新能力减弱,证明G3 Terc-/-小鼠中miR-126的表达下调是对端粒功能障碍的一种保护机制。

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1.引言

2.材料与方法

2.1 实验动物、试剂及相关仪器

2.2 实验方法：

3.实验结果

3.1 PCR 鉴定小鼠基因型

3.1 PCR 鉴定Terc-/- G3，miR-126 F/F Mx-Cre小鼠基因型

3.2 miR-126基因条件敲除小鼠骨髓造血干/祖细胞比例流式分析

3.3 流式细胞仪检测miR-126基因条件敲除小鼠脾脏发育情况

3.4 miR-126基因条件敲除对胸腺发育无影响

3.5 miR-126基因条件敲除小鼠的造血干细胞细胞周期的分析

3.6 流式细胞仪检测 miR-126基因条件敲除小鼠的造血干细胞凋亡情况

3.7 miR-126基因条件敲除有利于髓系细胞发育，对LT-HSC克隆形成能力无影响。

3.8 miR-126在骨髓干细胞中的表达

3.9 体外用慢病毒介导的方法在造血干细胞中过表达miR-126

3.10 竞争性移植实验检测 miR-126 过表达后WT和G3 Terc-/- 造血干细胞自我更新和造血重建能力

4.讨论

5.结论

参考文献

附录