培养胚胎、小儿皮肤成纤维细胞的比较及TGF-β1对小儿成纤维细胞的干预研究

摘要

目的:研究培养人胚胎、小儿皮肤成纤维细胞及TGF-β1干预后小儿皮肤成纤维细胞的盘状结构域受体1(DDR-1;discoidin domain receptor)、基质金属蛋白酶13(MMP-13;matrix Metalloproteinases)、增殖细胞核抗原(PCNA;Proliferating cell nuclear antigen)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ;Col-Ⅰ)及Ⅲ型胶原(collagenⅢ;Col-Ⅲ)的表达及相互关系,从而探讨Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解途径并观察培养胚胎与小儿成纤维细胞的形态特征。
　　方法:1.原代培养小儿包皮成纤维细胞(human postnatal dermal fibroblast;hPDF)和人胚胎皮肤成纤维细胞(human fetal dermal fibroblast;hFDF)并传代;2.应用HE染色法观察hFDF与hPDF的形态结构特点;3.应用免疫组织化学S-P法检测hFDF与hPDF的DDR-1、MMP-13、PCNA(Proliferating cell nuclear antigen)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ;Col-Ⅰ)及Ⅲ型胶原(collagenⅢ;Col-Ⅲ)的表达;4.利用外源性转化生长因子β1(TGF-β1)(5ng/ml)干预hPDF,并设立TGF-β1未干预的对照组,分别于TGF-β1孵育8小时、24小时、48小时、96小时收获细胞;5.应用免疫组织化学S-P法观察不同时间点TGF-β1干预组与对照组hPDF的PCNA和DDR-1、MMP-13、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原的表达;6.应用IX-71显微成像系统(OLYMPUS)在低倍(×100)视野下观察分析及照相,用Image-pro6.0图像分析系统测定各项指标的平均光密度值;7.所得数据以均数±标准差(c±s)表示。采用spss19.0统计软件进行统计学分析,应用两独立样本t检验、秩和检验、重复测量方差分析、单因素方差分析、LSD检验、Pearson相关分析及多重线性回归分析法,P<0.05为具有统计学意义。
　　结果:1.hFDF组DDR-1、MMP-13、Ⅰ、Ⅲ型胶原的平均光密度值皆高于hPDF组(P<0.05),hFDF组与hPDF组的Ⅲ/Ⅰ胶原及PCNA的平均光密度值差异无统计学意义(P>0.05)。2.hPDFⅠ型胶原对DDR-1、Ⅲ型胶原、MMP-13的线性回归方程显著成立Y=0.025-0.853x1+0.408x2+0.772x3(x1:DDR-1;x2:Ⅲ型胶原;x3:MMP-13),其余各线性回归方程皆不成立。3.TGF-β1干预与对照组的两组细胞在不同时间点上 I型胶原、Ⅲ型胶原、DDR-1、MMP-13的平均光密度值不同(P<0.05),其中I型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-13表达的基线上调(P<0.05)。4.DDR-1对Ⅰ、Ⅲ型胶原:Y=0.016+0.238x1-0.100x2(x1:Ⅰ型胶原;x2:Ⅲ型胶原);Ⅰ型胶原对DDR-1、Ⅲ型胶原:Y=0.002+0.338x1+1.084x2(x1:Ⅲ型胶原;x2:DDR-1);Ⅲ型胶原对Ⅰ型胶原、DDR-1、MMP-13:Y=0.016-0.269x1-0.015x2+0.914x3 MMP-13)三条线性回归方程显著成立。
　　结论:1.hFDF比hPDF功能活跃。2.胶原—成纤维细胞信号系统中,胶原产生→激活胶原受体 DDR-1→激活基质金属蛋白酶MMP-13途径在小儿胶原降解中发挥了作用,但在胚胎胶原降解中未发挥作用。3.在hPDF中,TGF-β1可以刺激Ⅰ型和Ⅲ型胶原、MMP-13的合成。4.TGF-β1干预后,胶原产生→激活胶原受体DDR-1→激活基质金属蛋白酶MMP-13途径在小儿胶原降解中发挥了作用,但TGF-β1干预后小儿胶原的降解并非由其一条途径完成,还存在其它途径及细胞因子的协同作用。5.TGF-β1干预后,胶原与DDRs相互作用的正反馈环路得以激活并发挥作用。

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中文摘要

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前言

第一部分胚胎与小儿皮肤成纤维细胞的DDR-1、MMP-13、Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达及关系

材料与方法

1 实验材料

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

结果

1 胚胎与小儿正常成纤维细胞

2 免疫组织化学法

讨论

结论

第二部分TGF-β1对小儿皮肤成纤维细胞的DDR-1、MMP-13、Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达的影响

材料与方法

1 实验材料

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

结果

1 免疫组织化学法

2．1.1 I型胶原：

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

无瘢痕愈合的信号转导机制研究进展综述

一、受体酪氨酸蛋白激酶信号转导与无瘢痕愈合

二、TGF-β途径与无瘢痕愈合

三、Wnt信号通路与无瘢痕愈合：

四、神经发育信号通路与无瘢痕愈合

五、细胞信号转导与无瘢痕愈合的展望

参考文献