裸鼠小肝综合征模型的建立和肝细胞再生特点

摘要

目的:通过肝大部切除术建立裸鼠小肝综合征模型。通过生存曲线、肝功能检测、肝脏活检及病理学检测，对模型进行评价。探讨小肝综合征模型建立的方法、可行性、条件及其肝细胞再生特性。
　　方法:先取10只裸鼠进行肝脏解剖，对其进行在体及离体肝脏解剖学观察。了解肝脏解剖结构、裸鼠肝脏与体重的百分比和各肝叶占肝脏的比重。制定肝叶切除方法，熟练肝大部切除术。将40只幼龄裸鼠（5周龄，体重22.3±1.8g）随机分为4组，每组10只，进行不同比例的肝部分切除术。分别为组1:切除25％肝组织;组2:切除50％肝组织;组3:切除75％肝组织;组4:切除80％肝组织。观察裸鼠术后的生存状况、生存时间(d），统计其生存曲线;手术前1h和手术后1、4、7、14、21、28d各组裸鼠经心脏穿刺取血0.1ml，测定血清谷丙转氨酶(Alaninetransaminase，ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、总胆红素(total bilirubin，TBIL)、白蛋白(albumin，ALB)值。术中切除的正常肝组织及手术后2、7、28、60d时行裸鼠肝组织活检（死亡裸鼠及时尸解和肝组织标本取检），行苏木精-伊红染色法(hematoxylin andeosin stain，HE染色)、病理组织学光镜观察;同时，标本行肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)的免疫组化检测。组间数据的比较采用重复测量方差分析，检验水准a=0.05，P＜0.05具有统计学意义。
　　结果:①裸鼠肝脏大致分为六叶，约占体重的（3.63±0.05）％，其中左叶占肝脏比例为（38.44±0.41）％，中叶占（26.44±0.59）％，三角叶占（14.08±0.33）％，尾状叶占(11.84±0.53)％，右上叶占(3.49±0.28)％，右下叶占（5.71±0.22）％。②组1、2、3、4裸鼠术后60d存活率分别为100％、100％、70％和20％。③肝组织大体观察:术前裸鼠肝脏色泽红润，质地柔软。肝叶切除术后死亡裸鼠进行解剖尸检可见剩余肝脏组织色泽黄，呈淤胆状态，不同程度的脂肪变性，淤血肿胀，体积增大，质地较正常肝组织稍硬，腹腔可见少量腹水。术后第2d，组1、2肝组织色泽红润，质地软;组3、4术后肝组织颜色稍暗，质地稍硬，其中组4腹腔中有少量腹水。术后第7d，组1、2肝组织红润，质地柔软，肝脏组织体积再生;组3、4可见肝脏组织颜色较之前红润，质地较正常肝组织稍硬，但有部分裸鼠残留肝组织外观有脂肪肝样变化。术后28d可见组1、2、3、4肝脏组织体积几乎与术前肝脏体积相等，组3、4肝脏组织颜色较之前红润，质地柔软。术后第60d处死裸鼠后切取肝脏，可见各组肝脏体积较术前明显增大，重量较术前平均值增加，肝重占比明显增加。④组1术前、术后ALT、AST、IBIL值无明显变化。组2术后1d ALT、AST、IBIL均轻度升高，术后第4d逐渐下降，术后第7d成稳定状态。术后第1d，组3、4裸鼠ALT、AST、IBIL值均明显升高。组4 ALT达到520.42±28.35 U/L、AST447.10±56.45U/L、TBIL9.10±0.35umol/L。术后第1d，组3、4 ALB值明显下降，组4裸鼠ALB最低，为32.42±1.83 U/L。⑤HE染色:术前所取得正常肝脏组织行HE染色示:中央静脉清晰，肝细胞胞质及胞核清晰，无炎细胞浸润。组1、2术后第2d获取的肝组织标本HE染色显示:中央静脉轻度淤血，间质稍水肿、肝细胞浆疏松，中央静脉和肝窦轻度扩张，汇管区有少量炎细胞浸润;术后第60d基本恢复正常肝脏组织结构。组3术后第2d肝脏活检HE染色示:中央静脉中度淤血，间质水肿，窦内有明显的血栓形成，散在的肝细胞坏死，少量细胞空泡化，汇管区存在较多炎细胞浸润。术后60d可见肝窦稍扩张，胞质及细胞核清晰。组4术后第2d肝脏活检HE染色示中央静脉重度淤血、大片的肝细胞坏死。术后60d可见少许肝细胞空泡化呈气球样变、细胞脂肪变性，但有明显肝细胞再生。⑥术前取得的正常的肝组织标本中无IL-6免疫阳性物表达，而组1术后肝细胞细胞质可见少量棕黄色IL-6免疫阳性物表达;组2、3术后第2d可见少量的IL-6免疫阳性物表达，术后7d可见大量的IL-6免疫阳性物表达，术后28、60d IL-6免疫阳性物表达逐渐下降;组4术后第2、7d可见IL-6阳性表达，术后28、60d阳性表达下降，死亡的裸鼠肝组织中可见少量的IL-6免疫阳性物表达。⑦HGF在术前的正常裸鼠肝组织内表达很少。而在术后组1裸鼠肝组织中可见HGF少量的表达;组2术后第2d、7d裸鼠肝组织中可见HGF大量表达，术后28、60d表达逐渐降低;组3、4中术后2d、7d可见大量的HGF表达的同时可见肝组织碎片状坏死，术后28d、60d HGF阳性表达下降。
　　结论:1.切除80％裸鼠肝脏可成功建立小肝综合征裸鼠模型。2.裸鼠肝脏切除后IL-6、HGF表达增加，与肝细胞再生有关。

目录

摘要

前言

材料与方法

1．实验材料、动物与仪器

2 实验方法

3 实验检测

4 统计学分析

结果

1．裸鼠肝脏的解剖结构和比例

2．生存曲线及生存状况

3．实验各组裸鼠肝功能检测

4．肝脏大体组织学观察

5．肝组织病理学检测

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述 肝细胞移植临床应用

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