JAK2/STAT3信号通道介导粒细胞集落刺激因子影响大鼠脑出血后细胞凋亡的相关研究

摘要

目的:脑出血是临床的常见病、多发病，致死率较高，发病机制不明，缺乏有效的治疗方法，明确发病机制，寻找治疗的分子靶点尤为重要。本实验通过研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)直接作用于大鼠脑出血(ICH)后，凋亡细胞及通道蛋白P-JAK2和P-STAT3的变化，探讨JAK2/STAT3信号传导通路介导G-CSF对脑出血的抗凋亡作用。
　　方法:健康成年SD大鼠120只，雌雄不限，体重在250～300g之间，鼠龄2～3月，分为对照组、脑出血组、治疗组，各组按断头取脑的时间点不同分为6h、24h、48h、72h、168h5个亚组。脑出血组以大鼠自体尾动脉不凝血50μL，采用改良二次注入法建立大鼠脑出血模型;对照组以50μ L生理盐水代替自体动脉血;治疗组的各个时间点均在手术后1h腹腔注射G-CSF60μ g/kg，其中6h组共注射1次，24h组共注射2次，48h组共注射3次，72h组共注射4次，168h组共注射5次，注射的时间间隔为12h。造模成功后，分别取各时间点大鼠行神经功能障碍评分。评分后，用1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，迅速断头取脑，将脑组织放于4％中性甲醛溶液中固定保存，以作石蜡包埋、切片，用于HE染色，P-JAK2、P-STAT3免疫组化染色及TUNEL法测定细胞凋亡。
　　结果:(1)脑出血组神经功能障碍评分与对照组对应的各时间点比较，评分较低(P＜0.05)，神经功能缺损较重;治疗组与脑出血组对应的各时间点比较，评分增高(P＜0.05)，神经功能受损减轻;脑出血组、治疗组神经功能障碍评分均在48h最低(P＜0.05)，神经功能受损最重;(2)HE染色可见对照组的脑组织结构完整，胞核、胞浆染色均匀;脑出血组6h、24h血肿周围神经细胞水肿明显，可见大量血细胞，少量炎症细胞，48h、72h时间点时血肿周围神经细胞肿胀坏死明显，核固缩，部分核溶解，染色深，血细胞减少，炎细胞侵润，少量胶质细胞增生，168h可见血肿周围神经细胞水肿较前减轻，炎细胞减少，胶质细胞增生明显;治疗组的脑组织结构变化在6h和24h与脑出血组相似，48h、72h和168h神经细胞肿胀坏死范围较脑出血组小，仍可见炎症细胞侵润及胶质细胞增生;(3)脑出血组、治疗组凋亡细胞6h可见极少量表达，24h、48h开始明显增多，72达高峰(P＜0.05)，168h仍有表达，分别与对照组的各亚组比较，表达增多(P＜0.05);治疗组与脑出血组对应的各时间点比较，表达减少(P＜0.05);(4)脑出血组、治疗组P-JAK2、P-STAT3阳性细胞6h可见少量表达，24h明显增多，48h达高峰(P＜0.05)，72h开始减少，168h仍有表达，分别与对照组比较，表达增多(P＜0.05);治疗组与脑出血组比较，表达减少(P＜0.05);(5)脑出血组神经功能障碍评分与凋亡细胞、P-JAK2、P-STAT3的表达呈负相关（r=-0.637，r=-0.848，r=-0.848; P＜0.05），凋亡细胞与P-JAK2、P-STAT3的表达呈正相关(r=0.466，r=0.760; P＜0.05)。
　　结论:粒细胞集落刺激因子能明显减轻脑出血时大鼠的神经功能缺损，减少凋亡细胞及P-JAK2、P-STAT3蛋白的表达，具有保护神经功能的作用;其机制可能是JAK2/STAT3信号通路介导G-CSF对大鼠脑出血后的抗凋亡作用。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验动物与分组

2 主要实验试剂及药物

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 结果分析

6 统计学分析

结果

1 观察大鼠的神经行为学变化

2 观察大鼠脑组织形态结构的变化

3 脑出血后血肿周围凋亡细胞的表达

4 脑出血后血肿周围P-JAK2的表达

5 脑出血后血肿周围P-STAT3的表达

6 脑出血组神经功能障碍评分、凋亡细胞与JAK2／STAT3通道蛋白三者之间的相关分析

讨论

1 大鼠脑出血模型的建立与评价

2 造模后大鼠的神经行为学变化

3 造模后大鼠的组织结构变化

4 脑出血后细胞损伤与修复的病理生理过程

5 粒细胞集落刺激因子

结论

参考文献

英文缩词表

致谢

JAK／STAT信号通道与脑出血细胞凋亡的研究进展 综述

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