小鼠肝泡型包虫病中miRNAs表达谱的初步筛选及miR-106b-25基因簇的表达和意义

摘要

目的：初步筛选泡球蚴感染宿主肝脏中miRNAs的表达谱并探讨miR-106b-25基因簇在肝泡型包虫病中的表达及意义。
　　方法：取雌性Balb/c小鼠随机分为实验组、对照组和正常组，实验组小鼠腹腔注射泡球蚴，对照组腹腔注射等容量生理盐水，正常组不作处理并在接种当日采集肝脏标本。接种后1月、3月和6月分别各取5只造模成功的实验组和对照组小鼠肝脏标本，提取RNA；将感染3月小鼠肝脏的小分子RNA标记后与miRNAs微阵列芯片杂交。扫描杂交后的芯片并进行数据分析，得到肝泡型包虫病的miRNAs表达谱。荧光定量 RT-PCR法检测在1月、3月、6月三个时间点泡球蚴病小鼠肝脏中miR-93、miR-106b、miR-494、miR-152、miR-191和miR-199a的相对表达，预测miR-93和miR-106b的靶基因并初步分析。
　　结果：基因芯片结果显示，相比对照组，实验组小鼠肝脏组织中有46个差异表达的miRNAs，29个上调，17个下调；其中上调2倍以上的有19个，下调大于2倍的有2个。荧光定量 RT-PCR验证结果：miR-93、miR-106b、miR-494、miR-152、miR-191和miR-199a在感染1月实验组小鼠肝内的相对表达量与对照组和正常组比较差异无统计学意义（P>0.05）。在感染3月实验组小鼠肝内的相对表达量与对照组和正常组比较均显著增高（P<0.05）；而miR-494和miR-191在感染6月的相对表达量与对照组和正常组比较显著增高（P<0.05），miR-93、miR-106b、miR-152和miR-199a差异则无统计学意义（P>0.05），与芯片结果一致。生物信息学分析发现，miR-93和miR-106b的共同靶基因p21可能与细胞凋亡及细胞周期调控等生物学功能相关。
　　结论：泡球蚴感染后的宿主肝脏 miRNAs表达谱发生明显改变，提示miRNAs可能参与了泡球蚴肝损伤的过程，推测miR-106b-25基因簇可能通过下调靶基因p21参与其中。

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封面

声明

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中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

1 泡球蚴接种小鼠模型大体观察结果

2 病理学检查结果

3 miRNAs芯片结果

4 RT-qPCR

5 靶基因预测结果

讨论

1 泡球蚴感染对宿主造成严重肝损伤

2 泡球蚴感染引起宿主肝内miRNAs表达谱的变化

3 miR-106b-25基因簇可能通过下调靶基因p21参与了泡球蚴肝损伤的过程

4 本研究的不足之处与展望

小结

致谢

参考文献

综述

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