胰腺癌中OCT4、PTTG1、TAGLN2的表达及TGF-β信号通路对TAGLN2在胰腺癌转移中的作用

摘要

胰腺癌（Pancreatic carcinoma)的发病率在世界范围内呈上升趋势，因其恶性程度高，是目前预后最差的消化道肿瘤。尽管医疗诊断水平不断提高，手术技术不断改进及肿瘤靶向药物治疗不断发展，但胰腺癌的治疗效果并没有明显改善，5年生存率没有明显提高。因此，进一步探索胰腺癌的发生、发展、增殖、侵袭转移机制、寻找新的诊断标记物和治疗靶点是提高胰腺癌治疗疗效的关键。
　　目的：
　　1.探讨OCT4在胰腺癌组织和癌旁组织（距癌边缘≥2cm）中的表达和临床病理特征之间的关系以及OCT4与胰腺癌细胞的增殖、分化和侵袭的关系；
　　2.研究PTTG1蛋白在胰腺癌组织和癌旁组织（距癌边缘≥2cm）中的表达及其与胰腺癌临床病理特征的关系；
　　3.研究TGF-β1和TAGLN2蛋白在胰腺癌组织和癌旁组织（距癌边缘≥2cm）中的表达及其与临床病理特征的关系和二者之间的相关性；探讨维汉民族胰腺癌中TGF-β1和TAGLN2蛋白表达的差异。
　　方法：
　　1.应用免疫组织化学方法半定量检测人胰腺癌的组织芯片中OCT4表达水平；应用Real-time PCR方法定量检测OCT4和AKT mRNA在胰腺癌细胞上的表达水平，用2-△△Ct方法计算AKT mRNA的表达；Western blot试验定量检测胰腺癌组织中OCT4蛋白表达；并应用MTT法检测感染Lv-shOCT4的细胞的增殖能力、碳酸脂膜侵袭实验测定感染Lv-shOCT4的细胞的侵袭能力。
　　2.应用免疫组织化学方法检测胰腺癌组织中PTTG1蛋白的表达；并对PTTG1蛋白表达水平与患者的临床病理特征关系进行分析。
　　3．应用免疫组织化学染色检测106例石蜡包埋切片胰腺癌组织中TAGLN2、TβRII、p-Smad2/3的表达；对TAGLN2、TβRII、p-Smad2/3的表达与胰腺癌临床病理特征进行分析；对其中46例液氮冷冻的新鲜组织标本-80℃冰箱保存的胰腺癌组织、癌旁组织标本应用Western blot方法检测TAGLN2、TβRII、p-Smad2/3的表达。
　　结果：
　　第一部分：
　　(1)OCT4在胰腺癌组织和癌旁组织主要位于细胞核中，胰腺癌组织中的表达强于癌周组织，两者间有统计学差异（P＜0.05）；
　　(2)应用Real-time PCR和Western blot assays检测不同分化程度胰腺癌细胞(Bxpc3, Panc-1和Mia PaCa-2)中OCT4的表达，在Panc-1细胞中OCT4的表达显著高于其他两型细胞中；
　　(3)OCT4表达与胰腺癌患者临床病理特征的关系中，与肿瘤的分化程度相关（P＜0.05），与肿瘤大小、部位、远处转移、年龄、性别无关（P＞0.05）；
　　（4）胰腺癌Panc-1细胞经转染成Lv-shOCT4后,应用Real-time PCR和Western blot试验检测OCT4和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的mRNA和蛋白表达水平。与NC和CON组相比，在Lv-shOCT4组中OCT4和AKT的表达明显下降(P<0.01,每组)；
　　（5）胰腺癌Panc-1细胞经转染成Lv-shOCT4后,使用MTT法连续3天检测细胞增殖能力；发现与NC和CON组比较，Lv-shOCT4组中OCT4以时间依赖的方式明显抑制了Panc-1细胞的增殖活力(P<0.01)；
　　（6）通过Transwell实验，与NC和CON组比较，Lv-shOCT4组Panc-1细胞的侵袭潜能明显减弱(P<0.01)，OCT4具有下调细胞侵袭能力的作用。
　　第二部分：
　　（1）胰腺癌组织中和癌旁组织中PTTG1蛋白主要在细胞质中有不同程度的阳性表达，胰腺癌组织明显强于癌旁组织，两者间有差异性（P＜0.05）；
　　（2） PTTG1表达与胰腺癌患者的性别有相关性，与肿瘤的分化程度、大小、位置、患者年龄、临床分期、远处转移无相关性（P＞0.05）。
　　第三部分：
　　（1）胰腺癌组织中TAGLN2、TβRII、p-Smad2/3的染色主要位于细胞质中，癌组织表达强于癌旁组织,两者间差别有统计学意义（P＜0.05）；
　　（2）免疫组化显示，胰腺癌组织中TAGLN2、TβRII、p-Smad2/3的蛋白表达与肿瘤组织分化程度、神经侵润、肿瘤分期有关（P＜0.05）；TβRII、p-Smad2/3的蛋白表达还与肿瘤远处转移有关；
　　（3）Western-blot验证了癌组织TAGLN2、TβRII、p-Smad2/3蛋白表达水平与肿瘤组织分化程度、神经侵润、肿瘤分期有关（P＜0.05）；
　　（4）并且胰腺癌组织中TAGLN2与TβRII、p-Smad2/3蛋白表达均具有正相关性；
　　（5）维汉民族胰腺癌组织中胶转蛋白2、TβRII和p-Smad2/3表达无差异（P＞0.05）；
　　结论：
　　第一部分：
　　（1）OCT4在胰腺癌中的表达水平与肿瘤的分化程度有关，与肿瘤的大小、淋巴结转移于否无关；下调OCT4表达，可抑制胰腺癌细胞的增殖、分化和侵袭性；
　　（2） OCT4可能通过AKT信号传导通路影响胰腺癌的发生发展；
　　第二部分：
　　PTTG1蛋白在人胰腺癌组织中高表达，其表达水平与胰腺癌患者的性别有关，与肿瘤位置、大小、分化程度、神经浸润、远处转移、年龄无关。
　　第三部分：
　　（1）TβRII、p-Smad2/3、TAGLN2在胰腺癌组织中存在蛋白的高表达；
　　（2）TβRII、p-Smad2/3、TAGLN2与胰腺癌的局部侵犯、肿瘤分化程度、肿瘤分期相关，与维汉民族、肿瘤大小、部位、性别、年龄无关；
　　（3）TAGLN2和TGF-β有正相关性，在胰腺癌的发生、增殖和转移中，可能具有协同作用；

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中英文缩略词对照表

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中文摘要

英文摘要

前言

第一部分OCT4的表达与胰腺癌的分化程度、增殖和侵袭的关系

1 研究内容与方法

2 结 果

3 讨论

4 小结

第二部分人垂体瘤转化因子1在胰腺癌中的临床意义

1 研究内容与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第三部分TGF-β信号通路在TAGLN2促进胰腺癌细胞转移中的作用

1 研究内容与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

结论

致谢

参考文献

综述

攻读博士学位期间发表的学术论文

个人简历

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