叶酸在甲基硝基亚硝基胍致哈萨克族食管上皮永生化细胞DNA损伤中的作用

摘要

目的:探讨叶酸在N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）致哈萨克族正常食管上皮细胞增殖、细胞周期及凋亡的作用，以及对DNA损伤等相关指标的作用，为哈族食管癌的防治提供理论依据。
　　方法:采用3因素3水平析因设计将体外培养的哈族正常食管上皮细胞暴露于不同叶酸浓度(0.000、0.400、0.800 ug/mL)和MNNG(0.000、0.750、1.500ug/mL)的培养液中作用48h、72h和96h后，(1)采用噻唑蓝(MTT)法检测叶酸及MNNG对哈萨克族食管上皮增殖的影响，采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡；(2)采用彗星实验检测DNA损伤水平；采用RT-PCR法检测APE1、MGMT基因mRNA的表达水平；(3)采用Western Blot法检测APE1、MGMT基因蛋白表达水平。
　　结果:随着叶酸浓度降低和MNNG浓度增加：(1)哈族正常食管上皮细胞形态发生了明显的变化，死细胞数目逐渐增多，细胞核出现不同程度的破裂，胞质不匀和细胞完整性损伤，细胞对MNNG损害的敏感性明显增加，96 h时尤为严重；(2)哈族正常食管上皮细胞的抑制率升高，差异有统计学意义，（P<0.01）；(3)哈族正常食管上皮细胞G0+G1期、S期和G2+M期细胞比例不同,差异有统计学意义（P<0.01），细胞周期阻滞在S期和G2+M期；(4)哈族正常食管上皮细胞的凋亡率升高，差异有统计学意义（P<0.01）；(5)各组DNA损伤指标发生了变化，即Tail DNA含量上升，彗星尾长增加，Olive尾矩增加，差异有统计学意义（P<0.01）；(6)APE1基因的mRNA及蛋白表达水平随着损伤的增加而增加，差异有统计学意义（P<0.01）；(7) MGMT基因的mRNA及蛋白表达水平则随损伤的增加而下降，差异有统计学意义（P<0.01）。
　　结论:叶酸浓度降低对MNNG致哈族食管正常上皮细胞损伤有一定的促进作用，而保持充足的叶酸则对MNNG的损害起到一定的保护作用。

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中文摘要

英文摘要

前言

研究内容与方法

1 实验材料及试剂

2 实验方法

3 质量控制

4 数据及统计学处理

5 技术路线

结果

1 哈族永生化正常食管上皮细胞形态

2 哈族正常食管上皮细胞生长曲线

3 染毒剂量确定

4 细胞一般生物学特性

6 叶酸对 MNNG 致哈族正常食管上皮细胞 APE1 和 MGMT mRNA表达

7 叶酸对MNNG致哈族正常食管上皮细胞APE1基因和MGMT基因蛋白水平表达

讨论

1 叶酸在MNNG致哈族正常食管上皮细胞形态中的作用

2 叶酸在MNNG致哈族正常食管上皮细胞增殖中的作用

3 叶酸在MNNG致哈族正常食管上皮细胞周期、凋亡中的作用

4 叶酸在MNNG致哈族正常食管上皮细胞DNA损伤中的作用

5 叶酸在MNNG致哈族正常食管上皮细胞APE1、MGMT基因表达中的作用

6 问题与展望

小结

致谢

参考文献

综述:叶酸缺乏与慢性疾病关系的研究进展

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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