声明
中英文缩略词对照表
前言
研究内容与方法
1.1 实验对象
1.2 主要试剂及配制方法
1.3 RNA提取及实时荧光定量PCR所需试剂
1.4 Western blot相关耗材与试剂
1.5 Western blot主要试剂配制
1.6 2.5%牛血清白蛋白封闭液配制
1.7 本研究所用的主要仪器
2 实验内容与方法
2.1 构建MDI法与MDI+Ad36法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化模型
2.2 检测Ad36标记基因 e1a与脂肪细胞分化标志基因pparγmRNA表达水平变化
2.3 检测脂肪分化标记基因PPARγ蛋白质表达水平变化
2.4 检测棕色脂肪标记基因pgc1α、ucp1、fgf21，线粒体氧化磷酸化相关基因atp5o、cox5b、nd2 mRNA表达水平变化
2.5 检测棕色脂肪标记基因PGC1α、UCP1、FGF21，线粒体氧化磷酸化相关基因ATP5O、COX5B、ND2蛋白表达水平变化
2.6 使用mTOR的抑制剂雷帕霉素后，检测细胞成脂情况
2.7使用mTOR的抑制剂雷帕霉素后，pgc1α、ucp1、fgf21、atp5o、cox5b、nd2 mRNA表达水平变化
2.8使用mTOR的抑制剂雷帕霉素后，棕色脂肪标记基因PGC1α、UCP1、FGF21，线粒体氧化磷酸化相关基因ATP5O、COX5B、ND2 蛋白质表达水平变化
3.1 样本控制
3.2 实验技术
3.3 仪器质控
4 统计学处理
5 技术路线
5.1 检测3T3-L1前脂肪细胞分化过程中e1a、pparγ基因表达水平变化
5.2 检测棕色脂肪标记基因pgc1α、ucp1、fgf21，线粒体氧化磷酸化相关基因atp5o、cox5b、nd2表达水平变化
5.3使用mTOR的抑制剂雷帕霉素后，检测pgc1a、ucp1、fgf21、atp5o、cox5b、nd2基因表达水平变化。
结果
1 Ad36标记基因e1a mRNA表达水平变化
2 检测MDI与MDI+Ad36诱导组细胞成脂情况
3 3T3-L1前脂肪细胞分化过程中，MDI诱导组与MDI+Ad36诱导组pparg mRNA与蛋白质表达水平变化
4 检测MDI与MDI+Ad36诱导组棕色脂肪标记基因、线粒体相关酶基因表达水平变化
4.1 检测MDI与MDI+Ad36诱导组棕色脂肪标记基因、线粒体相关酶基因mRNA表达水平变化
4.2 检测MDI与MDI+Ad36诱导组棕色脂肪标记基因、线粒体相关酶基因蛋白质表达水平变化
5 MDI与MDI+Ad36诱导组中p-mTOR、t-mTOR蛋白质表达水平变化
6 雷帕霉素处理3T3-L1前脂肪细胞后脂滴大小变化
7 雷帕霉素干预3T3-L1前脂肪细胞后棕色脂肪标记基因pgc1α、ucp1、fgf21，线粒体相关酶基因atp5o、cox5b、nd2 mRNA表达水平变化
8雷帕霉素干预3T3-L1前脂肪细胞后色脂肪标记基因PGC1α、UCP1、FGF21，线粒体相关酶基因ATP5O、COX5B、ND2蛋白质表达水平变化
讨论
1 肥胖的危害及Ad36与肥胖的相关性
2 脂滴大小与白色脂肪棕色化的相关性
3 Ad36对mTOR信号通路中pgc1α的调节作用
4 Ad36对ucp1、fgf21、atp5o、cox5b、nd2基因表达水平的影响
6 问题与展望
小结
致谢
参考文献
综述:Ad36与肥胖的相关性研究
攻读硕士期间发表的学术论文
导师评阅表
