鸭瘟病毒囊膜糖蛋白gH的原核表达及其间接ELISA方法的建立

摘要

鸭瘟是由疱疹病毒引起的鸭、番鸭和鹅等水禽的一种急性烈性传染病，该病毒能引起不同年龄和性别的鸭致病，发病率和死亡率都很高，严重地影响了养鸭业的健康发展。 本研究根据鸭瘟病毒包膜糖蛋白H(gH)基因序列设计三对引物，PCR扩增的基因片段分别定向插入到原核表达载体pET28，构建了三种原核表达质粒pET-gH、pET-gH1347和pET-gH1707，并转化宿主菌BL21(DE3)。表达结果显示去除了gH跨膜区和信号肽的gH基因片段(pET-gH1347和pET-gH1707)获得了表达，而全基因片段(pET-gH)未获得表达。Western-blot表明两种表达产物均能与鸭瘟病毒阳性血清发生特异性反应。鸭瘟病毒gH蛋白的成功表达，将有助于开展该基因功能的研究和血清学检测方法的建立。 用纯化gH蛋白作为包被抗原，建立了检测鸭瘟抗体的间接ELISA方法，并确定了ELISA最佳工作条件：抗原包被浓度为3 μ g/mL，4℃过夜，血清(1:80)和二抗(1:500)分别在37℃温育lh、30min，底物溶液37℃显色10 min。经重复性试验、交叉试验、敏感试验等试验结果表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高。试验证明，gH ELISA是检测DEV特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。

目录

文摘

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声明

第一章文献综述

1.1鸭瘟病原研究进展

1.2鸭瘟流行病学研究进展

1.3鸭瘟病毒基因结构与外膜蛋白的研究

1.4病原分子生物学研究进展

1.5鸭瘟病毒诊断方法的研究

1.6疫苗的研究进展

第二章实验研究

实验一鸭瘟病毒囊膜糖蛋白gH的原核表达、纯化和免疫印迹

2.1材料

2.2实验方法

2.3结果

2.4讨论

实验二gH蛋白抗原检测DEV抗体间接ELISA方法的建立

3.1材料

3.2方法

3.3结果

3.4讨论

结论

参考文献

附录

致谢

作者简介