提高绵羊体内外胚胎生产效率的研究

摘要

影响绵羊体内外胚胎生产效率的因素很多，制约了绵羊胚胎移植尤其是体外胚胎移植技术的推广。本研究通过对绵羊卵母细胞质量的监测、影响卵母细胞体外受精及胚胎移植受胎因素的研究，建立了一套可行的绵羊体内外胚胎生产技术体系。主要研究结果如下:
　　将绵羊卵母细胞置于亮甲酚蓝(BCB)染色液中90 min进行筛选，结果表明，26μM BCB筛选的细胞质着蓝色的阳性(BCB+)卵母细胞成熟率显著高于52μM筛选的BCB+卵母细胞和对照组(P＜0.01)，而选择率没有差异(P＞0.05)。BCB+卵母细胞直径显著高于（P＜0.05）BCB-卵母细胞。BCB+卵母细胞中谷胱甘肽(GSH)含量(6.39 pM/枚)极显著高于(P＜0.01)BCB-卵母细胞(0.26 pM/枚)。卵母细胞体外受精后，BCB+卵母细胞组的卵裂率和囊胚率皆极显著高于(P＜0.01)BCB-卵母细胞组，但和对照组间没有差异(P＞0.05)。
　　在研究了不同公羊个体精液、精子密度等对绵羊体外受精效果的影响后发现:不同个体的冷冻精子对卵裂率和囊胚率都有显著的影响(P＜0.05)，冷冻精液的受精效果与鲜精间没有差异(P＞0.05);精子密度在2-6×106个/mL之间对受精效果没有影响;精卵共孵育时间为12h和18h，不影响囊胚率(P＞0.05)，但受精18h的卵裂率显著高于受精12h的卵裂率(P＜0.05);SOF系统和CR1aa系统的培养液对受精效果没有显著影响(P＞0.05);对于四孔板而言，培养密度在50～80枚/孔之间，不影响胚胎后期发育(P＞0.05);早期用5％CO2，空气为平衡气，后期用5％CO2、5％O2，N2为平衡气的气体条件的卵裂率、囊胚率分别极显著高于单独使用这两种气体环境的卵裂率和囊胚率(P＜0.01);早期发育较快的胚胎发育能力更强，囊胚率极显著高于早期发育较慢的胚胎(P＜0.01)。
　　通过对可能影响胚胎移植受胎率的因素研究后发现:供受体发情时间差在±12h以内，不影响受胎率（P＞0.05）;移植2-3枚胚胎的受胎率极显著高于移植1枚(P＜0.01);囊胚移植受胎率显著高于2-8细胞期;在繁殖季节里，自然发情、注射PGF2α和PMSG+PGF2α等方式，三者间差异不显著（P＞0.05）;发育迟缓的胚胎移植后受胎率显著低于正常发育胚胎的受胎率（P＜0.01）;春秋季胚胎移植受胎率间没有差异（P＞0.05）;采用腹腔镜或手术方式移植囊胚，对受胎率没有影响(P＞0.05)。

目录

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论文说明

摘要

常用缩略语中英文对照表

第1章 绪论

1．1 亮甲酚蓝对卵母细胞筛选作用的研究进展

1．2 绵羊卵母细胞体外受精的研究

1．3 绵羊胚胎移植效果的研究

第2章 亮甲酚蓝染色液对绵羊卵母细胞的体外筛选作用

2．1 实验材料与方法

2．2 实验结果

2．3 讨论

第3章 提高绵羊卵母细胞体外受精效率的研究

3．1 实验材料与方法

3．2 实验结果

3．3 讨论

第4章 影响体内胚胎移植受胎率因素的研究

4．1 实验材料与方法

4．2 实验结果

4．3 讨论

第5章 结论

参考文献

致谢

作者简介