基于适配体的食品中黄曲霉毒素B1和M1的生物传感器检测方法研究

摘要

基于霉菌毒素的适配体，本研究开发了能够快速、灵敏检测黄曲霉毒素毒素B1(AFB1)的荧光生物传感器，能够快速、灵敏的检测AFB1首先，标记了荧光素的适配体与其标记了淬灭基团的互补DNA单链(cDNA)杂交，荧光因适配体靠近淬灭基团而被淬灭。当体系中加入AFB1后，适配体与AFB1形成复合物，导致适配体的结构发生改变，从而释放cDNA，最后适配体荧光恢复。通过监测荧光值的变化便能定量检测AFB1的浓度，在实验条件优化下，该方法的检测范围为5-100 ng·mL-1，检出限为1.6 ng·mL-1。此外，本研究选择其他7种霉菌毒素作为干扰物检测后荧光值没有明显改变，表明该适体传感器具有良好的特异性。同时，该传感器也可以应用于两种不同品牌婴幼儿配方米粉中AFB1的检测，获得的回收率分别为96.3％-106.8％和93.0％-101.2％该方法在定量和高通量检测食品中的AFB1方面有很大的潜在应用，并且检测的目标物还可以扩大到更大的范围。
　　AFB1可以直接污染食品，或者间接污染饲料，动物采食被AFB1污染的饲料后，在奶中产生次级代谢产物黄曲霉毒素M1(AFM1)。食用被AFM1污染的牛奶会对消费者身体健康造成危害。为了阻止AFM1带来的食品安全问题和减少经济损失，开发AFM1快速，灵敏的检测方法显得尤其重要。本研究开发了一种基于AFM1适配体的生物传感器能简单、灵敏的检测AFM1。标记了荧光基团的适配体首先与其标记了淬灭基团的互补DNA单链(cDNA)杂交，导致荧光被淬灭。加入AFM1后，适配体与AFM1形成复合物，释放cDNA，因此，便能定量AFM1的浓度。该方法的检测范围为5-100 ng·mL-1，检出限为1.7 ng·mL-1。另外，对该适体传感器的特异性进行了检测，实验结果表明该方法的特异性良好，其他的霉菌毒素均不会对荧光值产生影响，并且对两种不同品牌的婴幼儿米粉进行了实际加标回收实验，回收率分别为96.4％-103.6％和95％-102.8％。此检测技术对大通量，大范围食品中的AFM1的检测具有重要的意义。

目录

声明

摘要

符号、缩略语表(ABBREVIATIONS)

第1章 绪论

1．1 课题研究目的与意义

1．2 国内外研究进展

1．2．1 霉菌毒素及其危害

1．2．2 霉菌毒素的检测方法

1．3 本论文主要研究内容

第2章 建立荧光信号适体传感器检测黄曲霉毒素B1

2．1 材料和方法

2．1．1 实验材料和主要试剂

2．1．2 基于适配体的荧光实验检测AFB1

2．1．3 特异性检测

2．1．4 方法验证

2．2 结果与讨论

2．2．1 设计基于适配体的荧光信号传感平台

2．2．2 优化互补DNA单链(cDNA)

2．2．3 优化cDNA2浓度

2．2．4 优化反应时间

2．2．5 定量检测AFB1

2．2．6 特异性检测

2．2．7 实际样品检测

2．3 小结

第3章 建立荧光信号适体传感器检测黄曲霉毒素M1

3．1 材料和方法

3．1．1 实验材料和主要试剂

3．1．2 基于适配体的荧光实验检测AF1

3．1．3 特异性检测

3．1．4 方法验证

3．2 结果与讨论

3．2．1 设计基于适配体的荧光信号传感平台

3．2．2 优化互补DNA单链(cDNA)

3．2．3 优化cDNA5浓度

3．2．4 优化反应时间

3．2．5 定量检测AFM1

3．2．6 特异性检测

3．2．7 实际样品检测

3．3 小结

第4章 全文结论

4．1 结论

4．2 创新点

4．3 展望

图表目录

参考文献

致谢

个人简历