BRAF基因与甲状腺癌临床及其预后关系的分子生物学研究

摘要

目的：最近研究发现的BRAFV600E突变是甲状腺肿瘤形成的一种重要遗传学事件，在PTC发生发展过程中可能起着重要作用。本研究旨在探讨甲状腺乳头状癌的发生机制，研究其分子遗传学改变与临床病理学特征之间的关系，并为其早期分子诊断、预后监测和靶基因治疗提供客观依据。同时，采用RFLP-PCR和MASA-PCR两种方法检测基因突变，并进行比较，以提高基因突变的检出率，寻找一种高效、敏感、特异的突变检测技术。 方法：本研究收集了新疆石河子大学医学院第一附属医院病理科1983～2005年的PTC石蜡包埋组织86例，对照组42例(滤泡性癌7例，髓样癌2例，未分化癌2例，甲状腺腺瘤15例，结节性甲状腺肿15例及癌旁正常组织1例)。所有病例均由两名以上病理学教授按照WHO分类标准进行形态学观察。对97例甲状腺癌组织进行了病理形态学观察、免疫组织化学染色后，分别采用RFLP-PCR和MASA-PCR技术检测BRAFV600W突变，分析BRAFV600E突变与其临床病理学特征之间的关系。 结果：仅在67.4％(58/86)的PTC和1例甲状腺未分化癌中检测到BRAFV600E突变；PTC中，主要见于经典型PTC和微小癌，其突变率分别为73.0％(54/74)和2/3，对照组甲状腺良恶性病变中均未检测到此突变。由于BRAFV600E突变与RET/PTC重排均为PTC中常见的遗传学事件，因此，在将BRAFV600E突变与本实验组周晓明同学用RT-PCR检测的RET/PTC重排结果进行比较，发现PTC中BRAFV600E突变与RET/PTC重排相互独立存在。说明两者均为甲状腺乳头状癌特有的遗传学改变，其致癌机理可能不同，但两者的联合使用可提高PTC的诊断与鉴别诊断。 97例甲状腺癌的免疫组织化学染色显示，P21ras蛋白阳性率为73.2％，淋巴结转移组阳性率为70.0％，与未发生转移组相比较，无显著性差异；Ki-67分布指数多在Ⅰ级，仅有25例在Ⅱ～Ⅲ级；在随访44的例患者中，有10例发生了复发，13例Ki-67分布指数在Ⅱ～Ⅲ级；43例甲状腺癌组织RET抗体检测结果显示，RET蛋白阳性表达率为30.8％，主要表达于PTC组织中，乳头状癌和滤泡癌中阳性率分别为34.4％和14.3％，其它甲状腺恶性肿瘤中均不表达。RET蛋白和Ki-67的高表达可能与甲状腺癌的转移和复发有关，可作为预后评价的重要参考指标。 结论：1、BRAFV600E突变仅见于PTC和部分甲状腺未分化癌。PTC中BRAFV600E突变率为67.4％，表明BRAFV600E突变是成人散发性PTC的特异性分子遗传学改变，因此可用于PTC的诊断与鉴别诊断。2、BRAFV600E突变可能是PTC表型的重要决定因素之一，可用于PTC的分型及预后评价。3、PTC中，BRAFV600E突变和RET/PTC重排相互独立存在，说明BRAFV600E和RET/PTC在PTC形成中可能是相互独立的遗传学事件，其致癌机制可能不同。4、RET蛋白和Ki-67的高表达可能与甲状腺乳头状癌的转移和复发有关，可作为预后评价的重要参考指标。5、检测甲状腺癌石蜡包埋组织中BRAFV600E突变时，MASA-PCR具有高效、敏感、特异的特点，可用于突变检测。

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