抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体的制备及生物活性测定

摘要

细菌内毒素是革兰氏阴性细菌(GNB)细胞壁外膜的脂多糖(LPS)成分。它主要是由亲水性的多糖和类脂-A构成的,类脂-A是其生物活性中心。少量的内毒素就能引起脓毒血症和败血性的休克,从而导致高血压,心血管衰弱,多器官衰竭甚至死亡。应用抗体阻断法治疗人类内毒素血症已有多年历史,但由于抗内毒素血清制备成本高,尚未在兽医临床上使用。 本研究通过制备抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体,探讨防治奶牛乳房炎及内毒素血症的新途径。文章对提取大肠杆菌内毒素粗制品的两种方法进行了比较,；制备出鸡抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体,对卵黄抗体的变化规律进行了研究；用间接血凝法测定卵黄和血清中抗大肠杆菌内毒素抗体效价；用制得的抗内毒素卵黄体对小鼠进行动物毒性试验及动物保护试验。研究结果表明：1.提取大肠杆菌内毒素两种方法的比较结果表明：酚-氯仿-石油醚法提取的内毒素含量比热-酚水法提取的内毒素含量高,因此更适用于内毒素的大量提取。2.卵黄抗体变化规律表明：免疫初期卵黄与血清中抗体水平没有太大差异,30d以后随着抗体水平的迅速上升,卵黄与血清中抗体水平出现明显差异。3.用间接血凝检测抗内毒素卵黄抗体滴度达到1:64以上。4.未发现抗内毒素卵黄抗体对小鼠的毒性作用,小鼠保护试验结果表明,抗内毒素卵黄抗体对小鼠腹泻和死亡模型具有明显的保护作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

文献综述：细菌内毒素及其对奶牛乳房炎的影响

1.细菌内毒素的研究历史

2.细菌内毒素在膜中的位置及结构特点

3.细菌内毒素的生物学活性

4.细菌内毒素在体内的作用

5.细菌内毒素致病机理

6.细菌内毒素的提取

7.细菌内毒素的检测

8.细菌内毒素的治疗

9.抗内毒素卵黄抗体

10.细菌内毒素对奶牛乳房炎的影响

试验一：大肠杆菌内毒素的提取，含量与活性测定

1.材料与方法

1.1试剂和仪器

1.2供试菌株与培养

1.3内毒素提取方法

1.4内毒素粗制品含量测定

2.结果与分析

2.1 TAL凝集活性测定内毒素精制品中内毒素含量的结果

2.2终点显色法定量检测内毒素粗制品中内毒素含量的结果

2.3大肠杆菌内毒素粗制品产率

2.4分析

3.讨论

试验二：抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体的制备

1 材料与方法

1.1动物和免疫原

1.2试剂和仪器

1.3鸡的免疫

1.4间接血凝法测定卵黄和血清中抗大肠杆菌内毒素抗体效价

1.5抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体的制备

2结果

3讨论

3.1卵黄抗体与血清抗体效价比较

3.2卵黄抗体消长时问

3.3总结

试验三：小鼠内毒素致病模型建立及抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体保护试验

1材料与方法

1.1试验动物

1.2主要试剂

1.3大肠杆菌内毒素引起小鼠腹泻及死亡模型的建立

1.4抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体对小鼠的毒性试验

1.5抗大肠杆菌内毒素卵黄抗体(效价1：64以上)对大肠杆菌内毒素攻击的保护性试验

2结果

3讨论

小结及创新点

参考文献

附录 作者简介及在读硕士期间发表的论文

致谢