缺氧条件下AsO对肝癌HepG细胞表达VEGF和凋亡的影响

摘要

目的：研究常氧和缺氧条件下不同浓度As2O3对肝癌HpG2细胞表达VEGF和凋亡的影响，并进一步探讨其可能的作用机制。 方法：在肝癌HepG2细胞培养的基础上，实验分两部分。实验一，常氧和缺氧条件下不同浓度As2O3对肝癌HepG2细胞表达VEGF和凋亡的影响，分四组：常氧组；缺氧组：不同浓度（2、4、8μmol/L）As2O3组；缺氧（C0Cl2）+不同浓度As2O3组。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定常氧利缺氧条件下不同浓度As2O3对肝癌HpG2细胞生长增殖的影响；AnnexinV/PI双染色法流式细胞仪检测各组细胞凋亡；荧光免疫组织化学法测VEGF蛋白表达，RT-PCR测VEGFmRNA表达。实验二，常氧和缺氧条件下4μmol/L As2O3对肝癌HepG2细胞VEGF表达、HIF-1α表达、ROS水平及凋亡的影响，分五组：常氧组：缺氧组；As2O3组；缺氧+As2O3组；缺氧+As2O3+Mn（Ⅲ）TBAP组。AnnexinV/PI双染色法流式细胞仪检测各组细胞凋亡；激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内ROS的变化；免疫组织化学法检测VEGF、HIF-1α蛋白表达；RT-PCR检测VEGFmRNA、HIF-1αmRNA表达。 结果：实验一：（1）常氧和缺氧条件下不同浓度As2O3对肝癌HepG2细胞生长增殖的影响：不同浓度As2O3（2、4、8μmol/L）作用丁肝癌HpG2细胞均抑制细胞增殖，作用48h抑制率分别（22.101±2.243）％、（33.286±2.127）％、（45.360±3.089）％且均高于常氧组（p<0.05），细胞增殖抑制率随As2O3浓度的增加及作用时间（24、48、72h）的延长而增加（p<0.05）。同一浓度As2O3相同作用时间在缺氧条件下对细胞的抑制率高于常氧条件下（p<0.05）。（2）常氧和缺氧条件下不同浓度As2O3对肝癌HepG2细胞VEGF表达的影响：各实验组VEGF的表达均高于常氧组（p<0.01），其中As2O3浓度为4μmol/L时VEGF的表达最高，相同浓度的As2O3在缺氧条件下较常氧条件下更能促进VEGF的表达（3）常氧和缺氧条件下不同浓度As2O3对肝癌HepG2细胞凋亡的影响：一定浓度As2O3能明显促进肝癌HepG2细胞的凋亡，且早期凋亡率及总凋亡率随As2O3浓度的增加及作用时间的延长而升高（p<0.05），相同浓度的As2O3、相同作用时间缺氧条件下促细胞凋亡作用高于常氧条件（p<0.05）。实验二：（1）常氧和缺氧条件下4μmol/L As2O3对肝癌HepG2细胞VEGF表达、HIF-1α表达影响：各实验组VEGF表达、HIF-1α表达均高于常氧组（p<0.05），缺氧+As2O3组高于缺氧+As2O3+Mn（Ⅲ）TBAP组且均高于缺氧组和As2O3组（p<0.05）。（2）对ROS水平的影响：各实验组ROS水平均高于常氧组（p<0.05），缺氧+As203组高于缺氧+As2O3+Mn（Ⅲ）TBAP组且均高于缺氧组和As2O3组（p<0.05）。（3）对凋亡的影响：各实验组细胞早期凋亡率均高于常氧组（p<0.05），缺氧+As2O3组高于缺氧+As2O3+Mn（Ⅲ）TBAP组且均高于缺氧组和As2O3组（p<0.05）。 结论：（1）缺氧条件下不同浓度As2O3对肝癌HepG2细胞生长增殖的抑制和促VEGF的表达、细胞凋亡作用较常氧条件下更为明显。（2）缺氧和As2O3对肝癌HepG2细胞生长增殖、凋亡和促VEGF具有协同作用。（3）上述协同作用与ROS水平HIF-1α表达水平密切相关，可能是由于缺氧和As2O3作用肝癌HepG2细胞提高了细胞内ROS的水平增加了HIF-1α的稳定性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略表

声明

前言

材料与方法

1材料

1.1细胞系

1.2主要试剂

1.3主要仪器设备

1.4RT-PCR引物

2实验设计与分组

2.1HepG2细胞培养

2.2实验分组

3检测指标

4统计方法

结果

讨论

结论

参考文献

文献综述 活性氧(ROS)和HIF-1α在肿瘤细胞生长、增殖中的作用

致谢

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