苦瓜多糖和皂苷的提取纯化及对乳腺癌细胞MCF-7作用机理研究

摘要

苦瓜具有一定的食疗和药理功效，苦瓜多糖和苦瓜皂苷类物质更是具有一定的功能作用，他们具有一定的降血糖，增加抵抗力，抗病毒以及抗癌等功效。而乳腺癌在女性人群中最为常见，是及其难以治愈的疾病，也是导致死亡的原因之一。采用苦瓜多糖和皂苷对乳腺癌细胞MCF-7进行作用，可以有效地降低乳腺癌细胞MCF-7的增值，尤其是苦瓜皂苷作用更佳。
　　本论文以苦瓜多糖和皂苷为研究对象，通过大孔吸附树脂对苦瓜多糖纯化进行响应面优化试验，研究洗脱剂浓度、上样体积和洗脱剂用量对苦瓜多糖纯化效果的影响，并确定了优化的最佳工艺参数；采用泡沫分离技术对苦瓜皂苷进行进一步的纯化，研究不同物质量浓度、PH和温度对纯化效果的影响，通过正交试验确定最佳的纯化工艺条件；采用MTT法研究苦瓜多糖和苦瓜皂苷对乳腺癌细胞的增值抑制效果，并进一步应用HE染色、流式细胞技术和western-blot方法，对苦瓜皂苷抑制乳腺癌细胞增值机理进行了进一步的探讨。通过以上实验得出以下结论：
　　（1）通过对苦瓜多糖的纯化研究可知：在室温条件下多糖上样的质量浓度为2.0mg/mL，多糖上样体积为3BV，洗脱剂浓度为50％，洗脱剂体积为2BV时，纯化效果最好，多糖含量从26.01%提高到66.5%。纯化前后苦瓜多糖中蛋白质含量分别为4.12%和5.60%，水分含量分别为19.2%和18.9%。纯化后苦瓜蛋白含量反而增加，水分含量基本保持不变。
　　（2）通过对苦瓜皂苷的纯化研究可知：在物质量浓度为1.6mg/ml、PH为7.5和温度为30℃时，对苦瓜皂苷的纯化效果最好，纯度为92.8%；定性实验验证所提取的物质为皂苷类物质；经HPLC图谱分析，确定所提的苦瓜皂苷成分与张玉婵等提取的皂苷成分一致。说明苦瓜皂苷提取纯化技术的稳定性。
　　（3）MCF-7增殖抑制试验结果表明：糖纯度为26.01%，多糖作用浓度200μg/ml时，对MCF-7的抑制率达到最大值，为49.5%；多糖纯度为66.5%，多糖作用浓度仅为6.25μg/ml，对MCF-7的抑制率可达到最大值，为46.5%。纯化后的苦瓜多糖用量比纯化前的用量显著降低。这与苦瓜多糖的纯度有直接的关系；苦瓜皂苷对乳腺癌细胞的作用呈现时间和剂量依赖性，经24h和48h作用后，抑制率随剂量的增加而增大，且当苦瓜皂苷作用浓度达到500μg/ml时，两个不同作用时间段的抑制率相差不大，最佳抑制率为86%。
　　（4）HE试验结果表明，皂苷作用后的细胞呈现明显的胞浆浓缩、细胞质连接不紧密，细胞变小，核破碎，并有凋亡小体出现；经流式细胞术可检测到细胞周期的变化，经皂苷作用后，细胞凋亡率增加，细胞S期数目也显著增加，G1、G2期数目有所下降，且G2期数目下降更显著，这说明皂苷将细胞主要阻遏在S期。
　　（5）Western-blot试验进一步对皂苷的作用机理进行了研究，经研究随着苦瓜皂苷浓度的增加抗凋亡蛋白bcl-2的表达越少，所以皂苷是通过抑制抗凋亡蛋白bcl-2的表达来增加乳腺癌细胞MCF-7的凋亡的。

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第一章 文献综述

1.1 立题背景

1.2 苦瓜多糖提取纯化技术现状

1.3 苦瓜皂苷提取纯化技术现状

1.4 课题研究的内容和意义

1.5 技术路线

第二章 苦瓜多糖的提取纯化

2.1 试验材料

2.2 试验方法

2.3 结果与分析

2.4 结论

第三章 苦瓜叶皂苷的提取纯化

3.1 试验材料

3.2 试验方法

3.3 结果与分析

3.4 结论

第作用四章苦瓜多糖和苦瓜皂苷对乳腺癌细胞（ M C F-7 ）的增值抑制

4.1 试验材料

4.2 试验方法

4.3 试验结果与分析

4.4 结论

第五章 全文总结

第六章 创新点与展望

6.1 创新点

6.2 展望

参考文献

致谢

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