致羔羊脑炎病原菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

摘要

2011年12月中旬,新疆乌苏某规模化羊场一群杂交小尾寒羊陆续发生以脑炎为主要症状的疫病,先后死亡1月龄左右羔羊30余只,不仅造成该羊场较大的经济损失,而且对周边羊场构成威胁。为确定该羊场导致羔羊脑炎的病因,在开展现场流行病学、临床检查,以及病理剖解的基础上,对从三只病死羔羊脑、肝、脾、淋巴结等组织进行病原分离鉴定。采用病料涂片染色镜检,分离株生化试验、PCR检测、16SrRNA序列分析、进化树分析、药物敏感性、小鼠致病性及小鼠脑组织病理学观察。结果如下:
　　1.试验分离的菌株在染色镜检、培养特性及生化特性与以往新疆地区分离的菌株基本一致,均表现出对高温、低温、高盐和高碱有很强的耐受性,有明显的α或β溶血,且在高浓度的胆汁中能生长,完全符合肠球菌属的生物特性。
　　2.应用DNAman软件对分离株WS1、WS2、WS3、WS4、WS5通过同源性比对,与GenBank数据库中粪肠球菌(JQ993872)16SrRNA基因同源性分别为99.2％,99.0%,98.5%,98.5%,98.8%;经MEGA4.0软件分析的分子系统进化树(N-J法)表明5株菌与粪肠球菌个体之间的亲缘性最近。结果表明,该羊场导致羔羊脑炎死亡系由粪肠球菌所致。
　　3.药敏试验结果均显示分离株对庆大霉素、红霉素、克林霉素、万古霉素等产生较强的耐药性,分离菌株对呋喃妥因表现极为敏感,对青霉素、氨苄西林、环丙沙星等表现敏感。
　　4.对分离出的5株细菌制备成一定单位的菌悬液,腹腔注射小白鼠,观察小鼠致病情况。结果显示,感染小白鼠表现背毛逆立,转圈,站立不定等症状,在24小时内的死亡率为75%。从死亡小鼠的脑组织内回收细菌,经生化试验,PCR检测为粪肠球菌,表明分离株对小鼠有较强的致病性。
　　5.在病理切片的观察中,脑组织中有一个或多个区域有脓肿区形成,局部组织开始溶解,液化,组织结构模糊不清,血管充血,神经细胞外围有较大的空隙,这进一步说明了该菌株致小鼠脑组织的病变,对致羔羊脑炎的症状得到进一步的验证。

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前言

第一章:文献综述

一：致羔羊脑炎病原菌分析

1.1 细菌性脑膜炎

1.2 病毒性脑膜炎

1.3 寄生虫性疾病及其它疾病

二：肠球菌的研究现状

2.1 生物特性

2.2 检测方法

2.3 毒力基因

2.4 致病性

2.5 耐药性

2.6 潜在危害性

第二章：试验部分

试验一： 致羔羊脑炎的病原菌分离鉴定及部分生物学特性

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

试验二： 致羔羊脑炎病原菌的药物敏感试验

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

试验三： 致羔羊脑炎病原菌的溶血性和致病性性试验

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

试验四： 致羔羊脑炎病原菌对小鼠脑组织的病理切片观察

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

结论

参考文献

致谢

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