MTB PPS对耐利福平MTB耐药性的影响及其机制研究

摘要

目的：研究和探讨结核杆菌类泛素蛋白-蛋白酶体系统中Pup、Dop、PafA和Mpa基因过表达或缺失突变对单纯耐利福平结核杆菌耐药性的影响，进一步探讨其发生机制，为阐明结核杆菌耐药机理奠定理论基础。 方法：培养类泛素蛋白-蛋白酶体系统中Pup、Dop、PafA和Mpa基因过表达或缺失突变的单纯耐利福平的结核杆菌，利用RT-PCR或PCR对其进行鉴定。利用刃天青显色法，检测各菌株的最小抑菌浓度（MIC），比较分析和探讨单纯耐利福平结核杆菌临床分离株、类泛素蛋白-蛋白酶体系统中Pup、Dop、PafA和Mpa基因过表达或缺失突变菌株，对利福平MIC的影响。检测以上菌株分别加入甲苯、乙醚、TWEEN-80和Trixon X-1004种提高细胞壁通透性的药物前后，各菌株MIC变化情况，并比较分析上述各菌株，在使用4种改变细胞壁通透性的药物后，对利福平MIC的影响。检测以上菌株分别加入羰基氰氯苯腙、利血平、维拉帕米和氯丙嗪4种外排泵抑制剂前后，各菌株MIC变化情况，并比较分析上述各菌株在使用4种不同外排泵抑制剂后，对利福平MIC的影响。 结果：（1）成功培养及鉴定了Pup基因、Dop基因、PafA基因、Mpa基因过表达或缺失突变的单纯耐利福平结核杆菌临床分离株。（2）结核杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因过表达的单纯耐利福平结核杆菌临床分离株，均能增强单纯耐利福平结核杆菌对利福平的耐药性，而Pup、Mpa、Dop和PafA基因缺失突变的单纯耐利福平结核杆菌，均能显著降低单纯耐利福平结核杆菌对利福平的耐药性，P值均<0.05。（3）4种改变细胞通透性的药物能不同程度的降低各过表达或缺失突变结核杆菌菌株对利福平的MIC，P值均<0.05，并且类泛素蛋白-蛋白酶体系统与改变细胞通透性药物之间存在交互作用。（4）4种药物外排泵抑制剂能不同程度的降低各过表达或缺失突变结核杆菌菌株对利福平的MIC，P值均<0.05，并且类泛素蛋白-蛋白酶体系统与外排泵抑制剂之间存在一定交互作用。 结论：1. MTB PPS中Pup、Dop、PafA和Mpa基因过表达，能增强单纯耐利福平结核杆菌对利福平的耐药性；MTB PPS中Pup、Mpa、Dop和PafA基因缺失能显著降低单纯耐利福平结核杆菌对利福平的耐药性。2. MTB PPS可能通过调控细胞壁通透性来影响其耐药性的产生。3. MTB PPS可能通过调控外排相关通路蛋白来影响其耐药性的产生。

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文献综述:结核分枝杆菌单耐利福平机制的研究进展

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