氯化锂及绿原酸对大鼠肝细胞葡萄糖6磷酸酶基因表达的影响

摘要

目的：肝脏葡萄糖-6-磷酸酶是控制机体葡萄糖稳态的一个重要的酶，由于它是催化机体葡萄糖合成的最后一步生化反应，如水解6-磷酸葡萄糖为葡萄糖和磷酸。事实上，2型糖尿病的高血糖同肝脏胰岛素抵抗所致的肝糖过度输出有着紧密相关。因此葡萄糖-6-磷酸酶是糖尿病治疗的一个潜在的靶点。本实验旨在研究该酶的几种抑制剂对该酶的基因表达的影响作用，为进一步探讨利用该酶的抑制剂作为糖尿病的治疗手段提供理论依据和实验基础。 方法：以胶原酶原位灌注消化的方法分离制备大鼠肝细胞，用含10％FBS及牛胰岛素的1640培养液进行原代培养．细胞贴壁后，换用新鲜的含不同浓度的葡萄糖和葡萄糖-6-磷酸酶的不同抑制剂而不含血清和胰岛素的培养液培养4小时。然后提取细胞总RNA，采用半定量RT-PCR的方法测定P36和P46的mRNA的丰度。 结果： 1．采用以胶原酶原位灌注消化的方法分离制备的肝细胞产率及活率均很高。细胞的活率可达到95％以上。 2．大鼠肝细胞在高糖培养液（25mMGLu）中培养4小时后，其催化亚基和转运亚基mRNA均明显增加。（P<0．05） 3．采用转运亚基特异的抑制剂氯原酸（5mM）与高糖培养液联合培养肝细胞4小时后，肝细胞葡萄糖-6-磷酸酶的催化亚基和转运亚基的mRNA的丰度均下降。（P<0．05） 4．利用糖原合成酶激酶3抑制剂氯化锂（10mM、20mM）培养肝细胞也可达到同样的抑制效果。 结论：利用胶原酶消化制备的肝细胞具有较好的产率和活率。体外高糖培养细胞4个小时后肝细胞葡萄糖-6-磷酸酶的两个主要组成部分P36和P46的表达均不同程度的增强。但是这种增强并非文献报道的呈剂量依赖性。利用P46的特异性抑制剂可以有效的降低高糖环境下的P36和P46的表达水平。P36和P46两者之间的活性可能相互关联。锂盐可能能够有效的抑制葡萄糖-6-磷酸酶的表达起到胰岛素增敏的作用。对葡萄糖-6-磷酸酶进行干预可能能够有效的改善糖尿患者的高血糖状态。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语

前 言

第一部分大鼠肝细胞原代培养方法的建立

材料与方法

结 果

讨 论

小 结

第二部分氯化锂及绿原酸对肝细胞葡萄糖6磷酸酶催化亚基和转运亚基表达的影响

材料与方法

结 果

讨 论

小 结

参考文献

致 谢