1，5-脱水山梨醇的测定及其应用研究

摘要

背景与目的：近年来，越来越多的人为糖尿病所折磨，糖尿病已经成为威胁人类健康的主要疾病之一，这引起了人们的极大关注。但是，遗憾的是，人类目前尚不能治愈这种疾病。因此，糖尿病作为一种慢性病，早预防，早诊断，早治疗，对于糖尿病患者的预后来说尤其重要。为适应这种要求，我们开展了糖尿病早期诊断试剂盒的研制与开发。而1,5-脱水-D-山梨醇是一种存在于人类血液中的正常化合物，由于其代谢稳定，在血液中波动范围小，可及时反应血糖的短期变化，具有空腹血糖、果糖胺和糖化血红蛋白所不具有的特征，在糖尿病的诊断与治疗中很有价值，值得临床推广和应用。 方法：由于本试剂盒的前半部分已经完成，本研究为糖尿病早期诊断试剂盒的研制与开发的后期实验部分，本试验拟计划包括五部分来完成： 一、已糖激酶底物特异性实验研究，应用相同的己糖激酶偶联6-磷酸葡萄糖脱氢酶试剂对3种浓度的12种糖进行催化特异性实验； 二、葡萄糖脱氢酶底物特异性实验研究，应用相同的葡萄糖脱氢酶试剂和固定参数对12种糖类物质进行催化率实验研究； 三、吡喃糖氧化酶底物特异性实验研究，应用相同的吡喃糖氧化酶试剂和固定参数对12种糖类物质、甘油和乙二醇等进行催化率实验研究； 四、葡萄糖清除实验研究，首先用已糖激酶将样品中内源性的葡萄糖转化为毗喃糖氧化酶(PROD)无催化作用的6-磷酸葡萄糖，然后用葡萄糖氧化酶检测样品中葡萄糖的残留情况； 五、1，5-脱水-D-山梨醇检测方法的建立与临床应用，使用已经建立的血清1，5-脱水-D-山梨醇检测方法对86例健康人、134例糖耐量异常病人和106例非胰岛素依赖型糖尿病患者进行检测。 结果： 一、将其对葡萄糖的催化作用定为100％时，已糖激酶/葡萄糖6磷酸脱氢酶试剂对山梨糖、甘露醇无催化活性；对山梨醇几乎无催化活性(0.01％)；对果糖，(0.59％)和木糖(0.54％)有极弱的催化活性；对半乳糖和1，5-脱水-D-山梨醇的催化活性分别为1.80％和1.24％；对乳糖无催化活性，对蔗糖和纤维二糖几乎无催化活性，对麦芽糖则有平均2.55％的催化活性。 二、将其对葡萄糖的催化作用定为100％时，葡萄糖脱氢酶对单糖中的半乳糖催化率最高可以达到17.13％，其次是木糖，可以达到8.27％，对1.5-脱水-D-山梨醇的催化作用则很弱，仅为1.51％，对果糖、山梨糖、甘露醇、山梨醇则几乎无催化作用；葡萄糖脱氢酶对双糖中的乳糖的催化率可以达到17.93％，对纤维二糖和麦芽糖的催化作用很低，两者分别为2.63％和1.80％，对蔗糖则几乎没有催化作用，仅为0.39％。 三、将其对葡萄糖的催化作用定为100％时，吡喃糖氧化酶对单糖中的山梨糖催化率最高可以达到87.51％，其次是木糖(83.17％)和1，5-脱水-D-山梨醇(82.32％)，半乳糖为40.69％，对果糖、甘梨醇、山梨醇几乎无催化作用；吡喃糖氧化酶对双糖中的麦芽糖催化率为3.19％，对乳糖、蔗糖、纤维二糖几乎无催化作用；对同等浓度的非糖类物质甘油和乙二醇的催化作用也很小，但是对于高浓度的甘油和乙二醇(应用浓度在2.2～3.3％)催化活性则很高。 四、本方法可将样品中高达60mmol/L，即10.8g/L的葡萄糖完全转化。 五、1，5-脱水-D-山梨醇水平在86例正常人(106.1±59.9)和134例糖耐量异常患者(49.4±40.1)及106例非胰岛素依赖型糖尿病患者(9.6±11.6)之间差异具有显著性意义(P<0.001)，糖尿病患者的血清1，5-脱水-D-山梨醇水平明显降低。 结论： 一、在建立新的检测方法前要对酶的底物催化特异性进行评价。 二、应用葡萄糖脱氢酶建立葡萄糖测定方法前应做葡萄糖脱氢酶的糖底物特异性催化实验研究。 三、建立1，5-脱水-D-山梨醇测定方法前应做吡喃糖氧化酶对不同糖底物、甘油和乙二醇的特异性催化实验研究。 四、由于吡喃糖氧化酶底物催化特异性不好，在测定1，5-脱水-D-山梨醇前，必须先清除样品中的葡萄糖，以避免干扰样本中1，5-脱水-D-山梨醇的测定。 五、1，5-脱水-D-山梨醇检测在诊断和观察糖尿病患者治疗效果方面有重要价值，值得临床推广应用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

前言

第一部分已糖激酶底物特异性实验研究

1材料与方法

2结果

2讨论

第二部分葡萄糖脱氢酶底物特异性实验研究

1材料与方法

2结果

3讨论

第三部分吡喃糖氧化酶底物特异性实验研究

1材料与方法

2结果

3讨论

第四部分葡萄糖清除实验研究

1材料与方法

2结果

3讨论

第五部分1，5-脱水-D-山梨醇的临床应用

1材料与方法

2结果

3讨论

总结

参考文献

在学期间发表综述

致谢