活化的HLA半相合外周血干细胞治疗晚期难治性实体瘤的基础和临床实验研究

摘要

目的： 初步探讨活化的HLA半相合外周血干细胞(haplo-PBSCs)在体内外的抗肿瘤活性和作用机制，评价其治疗晚期难治性实体瘤的安全性和可行性，并分析影响其治疗效果的相关因素，以期为晚期难治性实体瘤患者提供一条新的安全的异体免疫治疗途径。 方法： 42例晚期转移性/化疗抵抗性实体瘤患者，采用PCR－SSP法检测供受者之间的HLA配型情况，供者为与患者HLA配型半相合的健康直系亲属。供者经10μkg·dG-CSF动员3天后采集haplo-PBSCs，体外用大剂量rhIL－2培养4h后回输给患者，观察治疗后患者的一般症状改善和影像学评价情况并随访；采用流式细胞仪检测动员、活化前后的表型变化；采用半固体琼脂糖法测定haplo-PBSCs活化前后粒单细胞集落形成能力的变化；用LDH法检测大剂量rhIL－2短期活化前后haplo-PBSCs的非特异性杀瘤活性的变化；用ELISA法检测患者回输前后血清中Th1/Th2细胞因子的含量变化情况，从而全面评价haplo-PBSCs在体内外的抗肿瘤活性。并且按影响因素的情况分为不同亚组，分析比较不同亚组的总缓解率、临床获益率、总生存期、无进展生存期、生活质量总获益率。 结果： 42例患者，提取供者基因组DNA的纯度达(1.843±0.136)，浓度为(213.7±116)ng/ul。回输的活化HLA半相合haplo-PBSCs总数为(3.39±0.51)×1010。经G-CSF动员后采集的HLA半相合haplo-PBSCs与动员前相比，T细胞尤其是CD4+T细胞比例显著下降，而NK细胞比例显著上升(P<0.05)；经大剂量rhIL-2短期活化后，活化细胞(包括CD69+和CD25+细胞)亚群比例显著升高(P<0.05)，而且其对多种细胞系的非特异性杀瘤活性显著增强。治疗一个疗程后，患者外周血中CD4+、CD4+/CD8+、CD3-CD16+56+(NK)细胞比例较治疗前均明显升高(P<0.05)，而CD4+CD25+(Tregs)则明显降低(P<0.05)；外周血血清中Th1类细胞因子，如TNF-α、IFN-γ含量较治疗前明显升高(P<0.01)，而抑制细胞免疫功能的TGF-β含量明显下降(P<0.05)。42例患者接受一个疗程治疗后，10例生活质量改善，22例生活质量稳定，患者生活质量总获益率为76.2％，生活质量评分(KPS)较治疗前平均提高20分(0～30分)。临床获益率(CR+PR+SD)为73.8％(31例)，其中临床达到PR的7例(包括肾癌、卵巢癌各2例，肺癌、乳腺癌、结肠癌各1例)，无效11例。其中，肾癌和卵巢癌的临床获益率分别为90.0％和81.8％，相对于其他类肿瘤类型高，在治疗反应性和敏感性上可能占优势。全组患者的中位无进展生存期(PFS)为6.0个月，其中肾癌组、卵巢癌组、肺癌组、乳腺癌组的中位无进展生存期(PFS)分别为5.7、10.5、5.5、7.4个月。KIR不相合方向为GVH组在治疗反应性和生活质量改善上较HVG(或相合)组具有一定的优势，两组的总缓解率、临床获益率、总生存期、无进展生存期、生活质量总获益率分别为35.3％vs4.0％、94.1％vs60.0％、26.8±3.1vs17.4±3.0月、13.4±1.3vs8.0±0.9月、89.5％vs65.2％，P值均<0.05。供受者关系为母子/女治疗组较父子/女治疗组患者也具有明显的治疗优势，两组患者的1年随访治疗有效率、总生存期、无进展生存期、生活质量总获益率分别为18/24vs7/18、25.1±2.7vs13.7±3.2月、12.1±1.2vs7.5±1.3月、81.5％vs66.7％，P值均<0.05。 结论： 经大剂量rhIL-2短期活化的HLA半相合的haplo-PBSCs具有明显的抗肿瘤活性，患者耐受性良好，安全性高。haplo-PBSCs的输入在短期之内可以迅速打破患者体内的免疫抑制状态，促进抗肿瘤免疫的形成。KIR-配体不相合方向为GVH和供受者关系为母子/女的患者在治疗反应性具有一定的优势，可以获得相对较好的生存期和生活质量以及免疫状况的改善。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述 非清髓性异基因造血干细胞移植治疗恶性实体瘤的研究进展

致谢