Omentin与内质网应激及2型糖尿病非酒精脂肪肝关系研究

摘要

一、Omentin与2型糖尿病非酒精性脂肪肝的关系研究。
　　 目的:
　　 本研究通过测定2型糖尿病(Type2 diabetes mellitus，T2DM)患者中伴或不伴非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)的血浆网膜素(omentin)，旨在初步探讨网膜素在NAFLD的发病机制的作用，进而为NAFLD的临床防治提供新思路。
　　 方法:
　　 选择2009年7H至2010年1月天津医科大学第三中心医院内分泌科门诊和病房的初发T2DM患者190例行肝脏B型超声检查，按是否伴有非酒精性脂肪肝分为非脂肪肝组即A组(n=102)和脂肪肝组即B组(n=88)，二组受试者均测定身高(H)、体重(kg)、腰围(WC)、臀围(HC)，计算体质指数BMI(kg/m2)和腰臀比(WHR)。行口服75g葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素、C-肽释放试验，禁食8小时测定血浆空腹血糖(FBG)、空腹血浆胰岛素(Fins)、血脂，2h后抽血测血浆餐后血糖(2hPG)，计算稳态胰岛素抵抗指数HOMA-IR=(FBG×Fins)/22.5。血糖采用葡萄糖氧化酶法测定；血浆胰岛素采用放射免疫法测定(试剂由北京原子高科技术应用股份有限公司生产)；血脂采用酶法测定(试剂由北京原子高科技术应用股份有限公司提供)；omentin；测定采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linded immunosorbent assay，ELISA)(北京爱迪博生物有限公司)；B超检查用MYLAB30型B超诊断仪。应用SPSS13.0统计软件进行数据处理，采用方差分析，组间采用q检验，关系判定采用Spearman相关分析和logistic回归分析，受试者工作特征曲线(ROC)曲线确立风险值，卡方检验计算OR值。以P<0.05为具有统计学意义。
　　 结果:
　　 临床实验室资料比较除性别、年龄、BMI及HDL-C外，其余各项因素均存在统计学差异(P<0.05)，与A组比较，B组的omentin水平明显降低(P<0.05)。
　　 Spearman相关分析在T2DM患者中血浆omentin水平与InFins、InHOMA-IR、WC、FBG、2hPG呈负相关(均P<0.01)，与HDL-C呈正相关(P<0.05)。
　　 Logistic回归分析在T2DM患者中以脂肪肝有无(无脂肪肝为0，有脂肪肝为1)为因变量，各项相关因素为自变量进行logistic回归分析，结果显示omentin、HOMA-IR是发生脂肪肝的影响因素。
　　 Omentin预测脂肪肝的风险值B超作为脂肪肝的诊断标准，作出omentin和脂肪肝的ROC曲线图，在曲线上取灵敏度+特异度之和最大值点(灵敏度为52.3％，特异度92.2％)的omentin值(40ng/ml)作为预测2型糖尿病患者脂肪肝的风险值。根据其风险值将190例患者分为omentin>40ng/ml组和omentin<40ng/ml组，与脂肪肝作卡方检验。
　　 结论:
　　 血清omentin与非酒精性脂肪肝密切相关，可能影响T2DM患者NAFLD的发生发展。
　　 二、网膜素干预油酸诱导脂肪变肝细胞的影响。
　　 目的:
　　 本研究通过网膜素(omentin)干预油酸诱导体外培养脂肪变肝细胞，旨在阐明网膜素在NAFLD的发病机制及其信号转导机制，进而为NAFLD的临床防治提供新靶点。
　　 方法:
　　 采用正常成人HL-7702肝细胞株，随机分为3组。A组：正常对照组；B组：油酸诱导组，正常培养基加油酸进行细胞培养；C组：油酸联合网膜素组，正常培养基加油酸及网膜素进行细胞培养。采用油酸诱导HL-7702肝细胞株建立肝细胞脂肪变模型，采用油红O染色观察各组肝细胞脂滴变化的情况，采用ELISA法检测各组GRP78(Glucose regulated protein78，GRP78)、XBP-1(X-box bindingprotein1，XBP-1)、apoB100(Apolipoprotein B100，apoB100)。采用生化试剂盒检测各组肝细胞内TG的水平。
　　 结果:
　　 1、油酸可诱导HL-7702肝细胞株脂肪变性，能建立肝细胞脂肪变细胞模型。
　　 2、各组肝细胞GRP78含量的比较
　　 培养24小时、48小时、72小时后，对照组各时相点比较无统计学差异(P>0.05)。与正常对照组相比，模型组GRP78蛋白表达24小时升高，72小时达高峰，比较具有统计学差异(P<0.05)。干预组C1、C2、C3GRP78蛋白表达较模型组有所下降，72小时比较有统计学差异(P<0.05)。随着时间延长，C1组GRP78表达呈上升的趋势，各时相点比较无统计学差异(P>0.05)，C2、C3组72小时GRP78开始下降(P>0.05)。C1组、C2组、C3组各时相点GRP78表达有下降趋势，各时相点比较无统计学差异(P>0.05)。
　　 3、各组肝细胞XBP-1含量的比较。
　　 培养24小时、48小时、72小时后，对照组各时相点比较无统计学差异(P>0.05)。与正常对照组相比，模型组与干预组XBP-1蛋白表达升高，比较具有统计学差异(P<0.05)，干预组C1、C2、C3 XBP-1表达较模型组有所下降(P>0.05)，随着时间延长，C1、C2组XBP-1表达呈上升的趋势，各时相点比较无统计学差异(P>0.05)。C3组72小时XBP-1开始下降，各时相点比较无统计学差异(P>0.05)。C1组、C2组、C3组各时相点XBP-1表达有下降趋势，各时相点比较无统计学差异(P>0.05)。
　　 4、各组肝细胞apoB100含量的比较。
　　 培养24小时、48小时、72小时后，对照组各时相点比较无统计学差异(P>0.05)，随着时间的延长，模型组与干预组apoB100表达呈下降的趋势，各时相点比较有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比，干预组C1、C2、C3各时相点apoB100表达上升，比较无统计学差异(P>0.05)。干预组C1、C2、C3各时相点比较apoB100含量有升高的趋势，比较无统计学差异(P>0.05)。
　　 5、各组肝细胞TG含量的比较
　　 培养24小时、48小时、72小时后，对照组A组各时相点比较无统计学差异(P>0.05)，模型组B组各时相点比较有统计学差异(P<0.05)，干预组各时相点比较无统计学差异(P>0.05)。与正常对照组相比，模型组、干预组C1、C2、C3各时相点细胞内TG含量均逐渐增高(P<0.05)，模型组与干预组C1、C2、C3各时相点比较24小时无统计学差异(P>0.05)，48小时、72小时均有统计学差异(P<0.05)。
　　 结论:
　　 网膜素在一定程度上改善了体外培养肝细胞脂肪变的程度，网膜素通过下调GRP78(GRP78)、XBP-1(XBP-1)及上调apoB100改善了脂肪变肝细胞的生化指标，提示网膜素在非酒精性脂肪肝的发生发展中发挥着积极的作用。