OPN、MGMT、CLD-1和Cyclin A在PTC和FTC的表达与结节性甲状腺肿中ER、PRmRNA表达的研究

摘要

目的与方法：
　　甲状腺癌是最常见的一类内分泌恶性肿瘤，其中滤泡上皮起源的恶性肿瘤包括甲状腺乳头状癌(papillarythyroidcarcinoma，PTC)和甲状腺滤泡癌(follicularthyroidcarcinoma，FTC)。其中PTC是最常见的一个类型，占甲状腺恶性肿瘤的85％～90％，早期经淋巴道转移，若能早发现早治疗，预后较好；FTC比PTC恶性程度高、预后差，较常见，仅次于PTC而居第二位，早期易血道转移；二者尽管临床治疗相似，但更好的区分PTC和FTC对临床治疗和评估预后有很大帮助。近年来国外相继有文献报道OPN、MGMT、Claudin-1和CyclinA在人体多种恶性肿瘤中存在异常表达，也有发现在PTC和FTC的鉴别诊断中有较好的应用价值，但国内相关报道较少。
　　本文第一部分130例甲状腺癌标本为随机选取1984～2007年间天津医科大学总医院存档蜡块标本，应用免疫组织化学SP三步法检测OPN、MGMT、Claudin-1和CyclinA在其中的表达，研究OPN、MGMT、Claudin-1和CyclinA的表达与PTC和FTC的关系，探讨以上四个生物学指标在PTC和FTC鉴别诊断、发生、发展及转移中的作用。
　　本文第二部分5例结节性甲状腺肿、7例PTC和2例桥本甲状腺炎取白天津医科大学总医院病理科2008～2009年间新鲜手术切除标本，应用逆转录PCR(RT-PCR)和荧光定量PCR(SYBRGreenQRT-PCR)对结节性甲状腺肿中ER及PRmRNA的表达进行定性及半定量检测，PTCC桥本甲状腺炎为对照，研究结节性甲状腺肿中ER和PR的表达水平，探讨性激素与结节性甲状腺肿发病的关系。
　　结果：
　　1.PTC、FTC性别(男/女)比分别为1:3.37、1:3.70，PTC的性别比与FTC性别比经x2检验差异无统计学意义(x2=0.045，P>0.05)；PTC、FTC平均确诊年龄分别为42.28(岁)和40.96(岁)，经t检验差异无统计学意义(t=0.488，P>0.05)；PTC男性平均确诊年龄(48.74岁)大于女性平均确诊年龄(40.36岁)，差异有统计学意义(t=2.385，P<0.05)；FTC男性平均确诊年龄(53.10岁)大于女性平均确诊年龄(37.68岁)，差异有统计学意义(t=2.829，P<0.05)。PTC原发灶平均确诊年龄(42.80岁)与转移灶(41.53岁)及乳头状癌总的平均确诊年龄(42.28岁)相近，差别无统计学意义(t=0.408，P>0.05)。FTC高分化型平均确诊年龄(36.13岁)低于低分化型(45.58岁)，差别有统计学意义(t=-2.039，P<0.05)。
　　2.OPN主要表达于胞浆。PTC转移灶阳性率(97.06％)高于原发灶(93.88％)，但差别无统计学意义(x2=0.443，P>0.05)；FTC高分化型阳性率(69.57％)略低于低分化型(70.83％)，差别无统计学意义(x2=0.009，P>0.05)。OPN在PTC组阳性率(95.18％)明显高于FTC组(70.21％)，差异有显著性(x2=15.68，P<0.05)。
　　3.MGMT主要表达于胞核或胞浆。PTC中原发灶和转移灶中阳性率分别为75.51％、85.29％，提示转移灶MGMT的表达较高，但经秩和检验，差别无统计学意义(x2=1.180，P>0.05)。FTC高分化型和低分化型的阳性率分别为69.57％、54.17％，提示低分化型的MGMT的表达较低，但经秩和检验，差别无统计学意义(x2=1.178，P>0.05)。PTC的阳性表达率(79.52％)高于FTC的阳性表达率(61.70％)，经秩和检验，差别有统计学意义(x2=4.841，P<0.05)。
　　4.Claudin-1主要表达于胞膜或胞浆。PTC原发灶和转移灶阳性率分别为97.96％、97.06％，无明显统计学差异(x2=0.069，P>0.05)。FTC高分化型和低分化型的阳性率分别为91.30％、83.33％，提示低分化型的Claudin-1的表达较低，但经秩和检验，差别无统计学意义(x2=0.670，P>0.05)。PTC的阳性表达率(97.59％)高于FTC的阳性表达率(87.23％)，经秩和检验，差别有统计学意义(x2=5.573，P<0.05)。
　　5.CyclinA主要表达于胞核或胞浆。PTC原发灶和转移灶中阳性率分别为53.06％、67.65％，提示转移灶CyclinA的表达较高，但经秩和检验，差别无统计学意义(x2=1.766，P>0.05)。FTC高分化型和低分化型阳性率分别为26.09％、20.83％，经秩和检验，差别无统计学意义(x2=0.181，P>0.05)。PTC的阳性表达率(59.04％)高于FTC的阳性表达率(23.40％)，经秩和检验，差别有统计学意义(x2=15.330，P<0.05)。
　　6.PTC中63.86％的病例OPN和CyclinA表达一致(同时阳性或同时阴性)，经过Spearman等级相关分析，相关系数r=0.554(P<0.05)。FTC中48.94％的病例OPN和CyclinA表达一致，经过Spearman等级相关分析，相关系数r=0.253(P>0.05)。PTC中69.88％的病例MGMT和CyclinA表达一致，经过Spearman等级相关分析，相关系数r=0.774(P<0.05)。FTC中53.19％的病例MGMT和CyclinA表达一致，经过Spearman等级相关分析，相关系数r=0.210(P>0.05)。
　　7.OPN、MGMT、Claudin-1和CyclinA四种指标的灵敏度分别为86.15％、73.08％、93.85％和46.15％，以Claudin-1为最高。
　　8.RT-PCR结果显示结节性甲状腺肿、PTC和桥本甲状腺炎在100～250bp之间均可见ER阳性目的条带，均未见PR阳性目的条带。结节性甲状腺肿的ER阳性率为80％(4/5)，PTC的ER阳性率为14％(1/7)，桥本甲状腺炎的ER阳性率为100％(2/2)，三者之间ER阳性率差异有统计学意义(x2=7.371，P<0.05)，其中结节性甲状腺肿与PTC之间、PTC与桥本甲状腺炎之间有统计学差异(x2值分别为5.182和5.143，P<0.05)。
　　9.荧光定量PCR结果显示，结节性甲状腺肿中ER的表达量高于PTC，但低于桥本甲状腺炎。三者之间ER表达量差别均无统计学意义。
　　结论：
　　1.PTC平均确诊年龄(42.28岁)与FTC平均确诊年龄(40.96岁)无显著统计学差异。PTC男性平均确诊年龄(48.74岁)大于女性平均确诊年龄(40.36岁)，差异有统计学意义；FTC男性平均确诊年龄(53.10岁)大于女性平均确诊年龄(37.68岁)，差异有统计学意义。FTC高分化型平均确诊年龄(36.13岁)低于低分化型(45.58岁)，差别有统计学意义。
　　2.OPN在PTC组的阳性率明显高于FTC组，可以作为鉴别PTC和FTC的指标。MGMT中PTC组的阳性率明显高于FTC组，转移灶阳性率高于原发灶，高分化型阳性率高于低分化型，提示MGMT可以作为鉴别PTC和FTC的指标，并且与甲状腺癌的转移、分化有关系。Claudin-1在PTC的阳性表达率高于FTC，提示Claudin-1可以作为鉴别PTC和FTC的指标。CyclinA在PTC的阳性表达率高于FTC，提示CyclinA可以作为鉴别PTC和FTC的指标。PTC中OPN、MGMT均与CyclinA存在相关性，推测OPN、MGMT可以通过促进CyclinA的表达而加快细胞分裂。
　　3.四种指标的灵敏度比较为Claudin-1>OPN>MGMT>CyclinA，以Claudin-1最高(93.85％)。
　　4.综合检测OPN、MGMT、Claudin-1和CyclinA的表达对PTC和FTC的诊断、鉴别诊断、分化程度、肿瘤转移趋势和预后评估具有一定的参考价值。
　　5.甲状腺良恶性疾病中均可检测出ER基因的表达，虽然实时定量结果显示结节性甲状腺肿、PTC和桥本甲状腺炎三种疾病之间ER表达量差异无统计学意义，但是三种疾病ER基因阳性表达率为桥本甲状腺炎>结节性甲状腺肿>PTC，且差异有统计学意义，说明雌激素在甲状腺疾病的发生和发展中起一定的作用，提示雌激素对桥本甲状腺炎的影响是主要作用，而在结节性甲状腺肿发生发展中是与碘共同作用的，而在甲状腺癌所起的作用可能是间接的，而癌基因及其它因素起主要作用。PR在三种疾病中均未见目的条带，说明：PR在三种疾病中不表达或表达量较少。