CK19、Vimentin、VEGF、COX-2、VEGF-C在PTC和FTC的表达与PTC中ER、PR mRNA表达的研究

摘要

目的与方法:
　　甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma, PTC)和滤泡癌(thyroidfollicular carcinoma, FTC)是甲状腺滤泡源性肿瘤的常见类型，根据有否淋巴结转移和分化程度不同，PTC分为有转移组和无转移组，FTC分为高分化型和低分化型，国内外有文献报道CK19、Vimentin、VEGF、VEGF-C、COX-2与PTC和FTC的诊断、鉴别诊断、转移、分化有关。本文第一部分采用免疫组织化学方法对两种甲状腺癌中CK19、Vimentin、VEGF、VEGF-C、COX-2的表达进行检测，通过分析五种指标在这两种疾病中的表达，探讨这五种指标的表达与PTC和FTC的诊断、鉴别诊断、转移、分化之间的关系。CK19、Vimentin、VEGF、COX-2、VEGF-C在PTC、FTC阳性率的比较采用两独立样本率比较的x2检验，两组等级资料的相关性采用双变量相关分析(Bivariate)等级相关系数(Spearman相关系数)非参数检验，等级资料采用秩和检验，PTC和FTC年龄比较采用两独立样本的t检验。
　　本文第二部分应用分子生物学方法对雌激素受体(Estrogen receptor;ER)和孕激素受体(Progesterone receptor, PR)基因在甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿、桥本性甲状腺炎的表达情况进行研究，从而对雌激素受体和孕激素受体与甲状腺疾病的相关性进行分析，为临床的诊断、治疗和预后提供理论依据。ER、PR的结果采用完全随机设计下定量资料的方差分析。采用RT-PCR和SYBR GreenQRT-PCR两种方法对ER、PR两种基因进行定性、定量的检测。
　　结果:
　　1.PTC、FTC性别（女/男）比分别为3.27/1、3.15/1，PTC的性别比与FTC性别比经x2检验差异无统计学意义，x2=0.009(P＞0.05);PTC、FTC平均确诊年龄分别为41.86，41.65（岁），经t检验差异无统计学意义(t=0.085，P＞0.05)，PTC男性平均确诊年龄（47.68岁）大于女性平均确诊年龄(40.08岁)，t=2.313，P＜0.05。FTC高分化型平均确诊年龄（37.22岁）低于低分化型（46.07岁），t=-2.043，差别有统计学意义(P＜0.05)。
　　2.CK19主要表达于癌细胞的胞浆。乳头状癌中转移灶CK19的阳性率(91.43％)高于原发灶(89.83％)，滤泡癌中高分化型CK19的阳性率(74.07％)高于低分化型(48.15％)，差别无统计学意义(P＞0.05)。乳头状癌CK19总的阳性率(90.43％)高于滤泡癌(61.11％)，差别有统计学意义(P＜0.05)。
　　3.Vimentin阳性物质主要分布于胞浆，癌细胞和间质细胞呈阳性着色。选取的PTC、FTC病例中Vimentin的阳性表达率都是100％，强阳性率分别为50.00％、16.67％，PTC组的强阳性表达率高于FTC组的强阳性表达率，PTC转移灶Vimentin的阳性表达强度高于原发灶，FTC高分化型Vimentin的阳性表达强度高于低分化型，经秩和检验差别有统计学意义(P＜0.05)。
　　4.VEGF-C主要表达于癌细胞的胞浆，乳头状癌中转移灶VEGF-C的阳性率(88.57％)高于原发灶(84.75％)，滤泡癌中高分化型VEGF-C的阳性率(88.89％)高于低分化型(85.19％)，PTC、FTC总的VEGF-C阳性表达率分别是86.17％、87.04％，PTC组低于FTC组，差异都无统计学意义(P＞0.05)。在表达强度上，VEGF-C在PTC的强阳性表达率(24.69％)高于FTC(8.51％)(P＜0.05)。
　　5.COX-2表达于癌细胞的胞浆。乳头状癌中转移灶COX-2的阳性表达率(82.86％)高于原发灶(81.36％)，滤泡癌中高分化型(85.19％)高于低分化型(77.78％)，选取的PTC、FTC总的COX-2阳性表达率分别是81.91％、91.48％，PTC组高于FTC组的阳性表达率，三组差别均无统计学意义(P＞0.05)。
　　6.VEGF表达于癌细胞的胞浆，PTC中转移灶VEGF的阳性率(92.50％)高于原发灶(90.00％)，FTC中低分化型组(92.86％)高于高分化型组(87.10％)，PTC组(91.25％)高于FTC组的阳性表达率(89.83％)，三组差别无统计学意义(P＞0.05)。
　　7.90.43％的乳头状癌CK19和Vimentin的表达结果一致（同时阳性或同时阴性），经过Spearman等级相关分析，相关系数r=0.188(P＞0.05)。滤泡癌中仅有61.11％的病例CK19和Vimentin的表达结果一致，经过Spearman等级相关分析，相关系数r=0.228(P＞0.05)。乳头状癌中有95.74％的病例VEGF-C与COX-2表达结果一致（同时阳性或同时阴性），经过Spearman等级相关分析，两者在乳头状癌的表达呈正相关关系，相关系数r=0.438(P＜0.05)。在PTC原发灶、转移灶，FTC高分化型组、低分化型组VEGF-C和COX-2的免疫强度均显示弱阳性＞中度阳性＞强阳性，但VEGF-C中PTC原发灶和COX-2中FTC转移灶表现为中度阳性＞弱阳性＞强阳性。
　　8.四种指标中灵敏度最高的是Vimentin(100.00％)。
　　9.RT-PCR结果显示结节性甲状腺肿5例中有4例在100～250 bp之间ER有阳性目的条带，阳性率是80％，PR均未见阳性条带。
　　10.RT-PCR结果显示PTC7例标本中有1例在100～250 bp之间ER有阳性目的条带，阳性率是14％，PR均未见阳性条带。
　　11.RT-PCR结果显示HT2例标本在100～250bp之间中均可见ER阳性目的条带，均未见PR阳性条带。
　　12.实时定量PCR的结果显示，PTC与结节性甲状腺肿ER表达之间差别无统计学意义，桥本性甲状腺炎与结节性甲状腺肿比较差别无统计学意义。
　　结论:
　　1.本实验观察PTC和FTC平均确诊年龄(41.86岁，41.65岁)差异无统计学意义，PTC男性平均确诊年龄(47.68岁)大于女性平均确诊年龄(40.08岁)，FTC高分化型平均确诊年龄(37.22岁)低于低分化型(46.07岁)，差别有统计学意义(P＜0.05)。
　　2.乳头状癌CK19总的阳性率(90.43％)高于滤泡癌(61.11％)，有统计学意义(P＜0.05)。提示CK19可以作为鉴别PTC和FTC的指标。PTC组的强阳性表达率(51.76％)高于FTC组的强阳性表达率(27.27％)，PTC转移灶Vimentin的阳性表达强度高于原发灶，FTC高分化型Vimentin的阳性表达强度高于低分化型，有统计学意义(P＜0.05)。提示Vimentin可以作为鉴别PTC和FTC的指标，并且与甲状腺癌的转移、分化有关系。VEGF-C在PTC组的表达强度高于FTC组的表达强度，VEGF-C在PTC的强阳性表达率高于FTC(P＜0.05)，可以在表达强度方面为PTC和FTC的鉴别提供依据。
　　3.CK19、Vimentin在PTC、FTC的表达无相关性。VEGF-C、COX-2与滤泡癌的分化程度呈正比，并且两指标之间呈正相关趋势，乳头状癌的转移与VEGF-C、COX-2的表达呈正相关趋势，并且两指标之间呈正相关趋势。VEGF-C与COX-2经过Spearman等级相关分析，两者在乳头状癌的表达呈正相关关系，相关系数r=0.438，P＜0.05。在PTC原发灶、转移灶，FTC高分化型组、低分化型组VEGF-C和COX-2的免疫强度均显示弱阳性＞中度阳性＞强阳性，但VEGF-C中PTC原发灶和COX-2中FTC转移灶表现为中度阳性＞弱阳性＞强阳性。上述结果提示相似的癌组织分化程度越高和出现转移灶不仅表现在VEGF-C和COX-2表达阳性率的升高，还可以表现在免疫表达的阳性强度方面的一致性。提示VEGF-C和COX-2在两种癌的发生、发展、浸润转移中起到协同和相互促进的作用。
　　4.综合检测CK19、Vimentin、VEGF、VEGF-C和COX-2的表达对甲状腺滤泡源性恶性肿瘤的诊断、鉴别诊断、分化程度、肿瘤转移趋势和预后评估具有一定的参考价值。
　　5.甲状腺良恶性疾病中均可检测出ER基因的表达，其中桥本性甲状腺炎的ER基因表达量最高，乳头状癌次之，结节性甲状腺肿最低，说明雌激素在甲状腺疾病的发生和发展中起一定的作用，但是实时定量结果显示三种疾病之间差异无统计学意义，提示雌激素对甲状腺疾病所起的作用可能是间接的。甲状腺乳头状癌被认为是激素依赖性肿瘤，ER的检测为甲状腺疾病的诊断和甲状腺疾病的激素治疗提供了依据。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一 CK19、Vimentin、VEGF、COX-2和VEGF-C在甲状腺乳头状癌和滤胞癌的表达

1．1 对象和方法

1．1．1 对象

1．1．2 实验方法

1．2 结果

1．2．1 临床资料分析

1．2．2 甲状腺疾病的病理学观察

1．2．3 免疫组织化学染色观察结果

1．3 讨论

1．3．1 甲状腺乳头状癌和滤泡癌临床资料和病理学分析

1．3．2 免疫组织化学结果分析

1．4 小结

二 PTC中ER、PR mRNA表达的研究

2．1 对象和方法

2．1．1 组织

2．1．2 主要试剂或试剂盒

2．1．3 主要仪器

2．1．4 实验方法

2．1．5．结果判断

2．1．6．结果分析

2．2 结果

2．2．1 目的基因在甲状腺表达的结果

2．2．2 实时定量的结果

2．3 讨论

2．4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 PTC和FTC诊断与鉴别诊断中有价值的癌基因和细胞因子

致谢