乳腺浸润性乳头状癌的临床病理特征研究及Nek2C与乳腺癌的初步研究

摘要

第一部分
　　目的:
　　探讨乳腺浸润性乳头状癌的临床病理特征及分子免疫表型，分析浸润性导管癌与浸润性乳头状癌的无瘤生存及总生存以及乳头状癌的四种分子亚型的预后情况。
　　方法:
　　选取2000年1月至2011年5月共284例浸润性乳头状癌病例。从同期的13428例浸润性导管癌病例中随机选取300例。对选取的2003年之前的所有病例做常规Her2免疫组化染色。比较浸润性乳头状癌和浸润性导管癌的临床病理特征及预后情况。同时COX多因素分析浸润性乳头状癌的无瘤生存及总生存情况，对11例死亡病例探讨其浸润类型、复发部位、复发时间、复发肿瘤分级、转移时间及死亡时间。同时评估浸润性乳头状癌4种分子亚型的临床病理特征及无瘤生存和总生存。
　　结果:
　　浸润性乳头状癌与浸润性导管癌相比，在年龄、肿瘤分级、淋巴结状态、绝经状态方面有统计学意义(P<0.05)。在肿瘤大小、家族史、放疗、化疗、内分泌治疗、分子分型方面，两者比较无统计学差异(P>0.05)。浸润性乳头状癌的5年总生存率(92.77％vs87.95％)及无瘤生存率(87.95％vs80.72％)均高于浸润性导管癌。在11例死亡的浸润性乳头状癌中，有4例是纯型的，7例混合有其它浸润成分，如浸润性导管癌、浸润性小叶癌、浸润性微乳头状癌。在浸润性乳头状癌的4个分子亚型中，luminalA，luminalB，Her2及三阴型分别占51.06％、17.25％、13.03％、18.66％，其5年总生存率分别为97.78％，92.31％，81.82％，85.71％，5年无瘤生存率分别为95.56％，84.62％，72.73％，78.57％。luminalA型5年总生存率和无瘤生存率均高于其它亚型。
　　结论:
　　与浸润性导管癌相比，浸润性乳头状癌的预后较好，其5年无瘤生存率及总生存率均高于浸润性导管癌。浸润性乳头状癌的复发肿瘤多为中、高分级，且纯型的病例死亡率与混合型相比较低。在浸润性乳头状癌的4个亚型中，luminaA型占51.06％，其5年总生存率和无瘤生存率均高于其它亚型，预后相对最好。
　　目的:
　　为探讨NIMA相关激酶2(NIMA-relatedkinase2，Nek2)的剪接异构体Nek2C在乳腺上皮恶性转化中的作用，本实验在结合前期研究成果的基础上，进一步探讨乳腺癌发生发展模式的不同阶段Nek2C的表达水平，分析其在乳腺癌生长、侵袭中的作用及与乳腺癌发生发展的关系，为乳腺癌的诊断、治疗等提供新的理论基础和实验依据。
　　方法:
　　以国内外相关研究为依据，在前期的研究基础上，用乳腺普通增生细胞系MCF10A，不典型增生细胞系MCF10AT，导管内癌细胞系MCF10DCIS.com和浸润性导管癌细胞系MCF10Cal四个细胞系建立乳腺癌的多阶段发生发展模型。采用RNA干扰技术对内源性Nek2C表达高的细胞系MCF10DCIS.com和MCF10Cal进行干扰，同时将Nek2C质粒转染进内源性Nek2C表达低的细胞系MCF10A和MCF10AT。PCR和westernblot分别检测其mRNA和蛋白质表达水平，同时对其生长能力，浸润及迁移进行检测。选取不同阶段的乳腺组织采用PCR技术检测其Nek2C的mRNA表达水平。
　　结果:
　　1.Nek2C质粒转染后的MCF10A和MCF10AT细胞分别采用westernblot和半定量PCR检测Nek2C表达水平，结果显示，与阴性对照组相比，Nek2C质粒转染后的细胞其Nek2C的mRNA和蛋白水平均表达上调，而且细胞生长活跃。
　　2.合成特异的siRNA寡核苷酸，采用RNA干扰技术沉默Nek2C表达高的细胞系MCF10DCIS.com和MCF10Cal，半定量PCR验证显示Nek2CmRNA表达缺失，与阴性对照组相比转染后的细胞其生长、浸润及迁移能力均明显减弱，细胞的恶性程度降低。
　　3.在乳腺组织(正常乳腺组织、不典型增生乳腺组织、导管内癌及浸润性癌)中验证Nek2C的mRNA表达水平，PCR结果显示导管内癌和浸润性癌中的Nek2C表达水平明显高于正常组织和不典型增生。在浸润性癌组织中，高分级的癌组织中Nek2C高于低分级的癌组织。
　　结论:
　　1.在乳腺癌发生发展过程中(正常乳腺上皮细胞→导管上皮不典型增生→导管原位癌→浸润性癌)Nek2C的表达水平表现为逐步增加的趋势，提示Nek2C可能参与了乳腺组织的恶性转化。
　　2.Nek2C在乳腺癌的发生发展过程中起着重要的作用，在细胞水平，上调内源性Nek2C表达水平低的细胞系中的Nek2C水平，其细胞恶性程度增强，下调内源性Nek2C表达水平高的细胞系中的Nek2C水平，其细胞的恶性程度减弱。
　　3.乳腺组织中的验证更加证实了细胞实验的结果，Nek2C表达水平随着乳腺组织恶性程度的增强而逐渐增强，随着组织分级的增加而增加，提示在乳腺恶性转化中，Nek2C扮演着重要的角色，同时表明Nek2C可望成为乳腺癌早期诊断和和高危人群筛选的辅助指标。