小檗碱对3T3-L1脂肪细胞炎症因子、脂肪因子和脂肪酸代谢的影响

摘要

目的：
　　1.观察小檗碱(Berberine)对3T3-L1脂肪细胞炎症因子，如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)，mRNA表达水平的影响。
　　2.观察小檗碱对3T3-L1脂肪细胞脂肪因子，如瘦素(leptin)、脂联素(adiponectin)和内脂素(visfatin)，mRNA表达水平的影响。
　　3.观察小檗碱对3T3-L1脂肪细胞脂肪酸代谢相关酶和蛋白，如脂肪酸合酶(fatty-acidsynthase，FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(acety1-CoAcarboxylase，ACC)、脂肪组织甘油三酯水解酶(adiposetriglyceridelipase，ATGL)和脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(adipocytefattyacidbindingprotein，AFABP/aP2)，mRNA表达水平的影响。
　　方法：
　　以分化成熟的3T3-L1脂肪细胞为研究对象，分组及处理方法如下：1.小檗碱剂量组：分为空白组、0μmol/L(对照组)、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L的小檗碱组；2.小檗碱时间组：分为空白组、对照组和10μmol/L小檗碱干预4、8、24、48小时组；处理完之后提取上述各组脂肪细胞的总RNA，采用实时定量逆转录聚合酶链反应(quantitativerealtimepolymerasechainreaction；qRT-PCR)检测各组脂肪细胞炎症因子(TNF-α和IL-6)、脂肪因子(瘦素、脂联素和内脂素)和脂肪酸代谢相关酶和蛋白(FAS、ACC、ATGL和AFABP)mRNA水平。
　　结果：
　　1.小檗碱对3T3-L1脂肪细胞炎症因子TNF-α和IL-6mRNA水平的影响不同剂量小檗碱处理组的TNF-αmRNA的水平有显著性差异(F=61.819，P<0.001)，小檗碱浓度在5-20μmol/L之间呈剂量依赖形式降低脂肪细胞TNF-αmRNA的水平；不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞TNF-αmRNA的水平有显著性差异(F=106.767，P<0.001)，呈时间依赖形式降低脂肪细胞TNF-αmRNA的水平。
　　不同剂量小檗碱处理组的IL-6mRNA的水平有显著性差异(F=111.505，P<0.001)，小檗碱浓度在5-20μmol/L之间呈剂量依赖形式降低脂肪细胞IL-6mRNA的水平；不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞IL-6mRNA的水平有显著性差异(F=65.528，P<0.001)，呈时间依赖形式降低脂肪细胞IL-6mRNA的水平。
　　2.小檗碱对3T3-L1脂肪细胞脂肪因子瘦素、脂联素和内脂素的mRNA水平的影响
　　不同剂量小檗碱处理组的瘦素的mRNA水平有显著性差异(F=181.846，P<0.001)，小檗碱浓度在5-20μmol/L之间呈剂量依赖形式降低脂肪细胞瘦素mRNA的水平；不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞瘦素mRNA的水平有显著性差异(F=39.065，P<0.001)，呈时间依赖形式降低脂肪细胞瘦素mRNA的水平。
　　不同剂量小檗碱处理组脂联素的mRNA水平无显著性差异(P>0.05)；不同时间小檗碱处理组脂联素的mRNA水平有显著性差异(F=4.323，P=0.018)，10μmol/L小檗碱作用48小时显著降低脂肪细胞脂联素的mRNA水平。
　　不同剂量小檗碱处理组的内脂素的mRNA水平有显著性差异(F=170.723，P<0.001)，小檗碱浓度在10-20μmol/L之间呈剂量依赖形式升高脂肪细胞内脂素mRNA的水平；不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞内脂素mRNA的水平有显著性差异(F=24.451，P<0.001)，呈时间依赖形式升高脂肪细胞内脂素mRNA的水平。
　　3.小檗碱对3T3-L1脂肪细胞脂肪代谢酶FAS、ACC、ATGL和AFABPmRNA水平的影响
　　不同剂量小檗碱处理组的FASmRNA的水平有显著性差异(F=73.369，P<0.001)，小檗碱浓度在5-20μmol/L之间呈剂量依赖形式降低脂肪细胞FASmRNA的水平；不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞FASmRNA的水平有显著性差异(F=78.562，P<0.001)，10μmol/L小檗碱作用24小时显著降低脂肪细胞FASmRNA的水平。
　　不同剂量小檗碱处理组和不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞ACCmRNA均无显著性差异，P>0.05。
　　不同剂量小檗碱处理组的ATGLmRNA的水平有显著性差异(F=14.834，P<0.001)，小檗碱浓度在5-20μmol/L之间呈剂量依赖形式降低脂肪细胞ATGLmRNA的水平；不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞ATGLmRNA的水平有显著性差异(F=20.761，P<0.001)，10μmol/L小檗碱作用8小时显著降低脂肪细胞ATGLmRNA的水平。
　　不同剂量小檗碱处理组的AFABPmRNA的水平有显著性差异(F=11.693，P<0.001)，小檗碱浓度在10-20μmol/L之间呈剂量依赖形式降低脂肪细胞AFABPmRNA的水平；不同作用时间小檗碱处理的脂肪细胞AFABPmRNA的水平有显著性差异(F=13.096，P<0.001)，10μmol/L小檗碱作用4小时显著降低脂肪细胞AFABPmRNA的水平。
　　结论：
　　1.小檗碱在一定浓度时间范围内可以改善3T3-L1脂肪细胞的炎症状态。
　　2.小檗碱在一定浓度时间范围内可以调节3T3-L1脂肪细胞脂肪因子的水平。
　　3.小檗碱在一定浓度时间范围内可以抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪酸形成及甘油三酯的水解。
　　4.通过以上体外实验结果，我们推断小檗碱可能通过改善脂肪细胞炎症状态、调节脂肪因子的水平以及脂肪酸代谢来改善胰岛素抵抗。