UVB照射对人角质形成细胞基质金属蛋白酶及其抑制剂表达的影响及白藜芦醇对此影响的干预研究

摘要

紫外线(Ultraviolet，UV)引起的皮肤老化称之为光老化(photoaging)。光老化的皮肤中可见一系列细胞因子如白介素、基质金属蛋白酶(MMPs)、活化蛋白(AP-1)以及DNA损伤的增加。MMPs可降解绝大部分细胞外基质(ECM)，是皮肤光老化的直接原因。基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)是MMPs的特异性内源性抑制物，能够抑制MMPs的活化与表达，从而阻止光老化的发生。白藜芦醇(Resveratrol，Res)是一类存在于植物中的多酚类化合物，具有很多对人体有益的作用，包括抗心血管疾病、抗肿瘤、抗炎、抗氧化等。开发天然制剂日渐成为防护皮肤光老化的手段之一。
　　目的①检测UVB照射HaCaT细胞后细胞增殖活性、MMPs及TIMPsmRNA的表达水平，探讨UVB致人皮肽角质形成细胞损伤的作用。②检测Res的干预对UVB照射HaCaT细胞后细胞的增飧活性、MMPs及TIMPsmRNA基因表达的变化，探讨Res对UVB所致人皮肤角质形成细胞损伤的防护作用。
　　方法①培养HaCaT细胞，绘制细胞生长曲线：②用30、60、90mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞，采用四甲基偶氮唑蓝比色实验(MTT法)测定HaCaT细胞的增殖活性；③逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同剂量UVB照射24h后HaCaT细胞MMP-1、MMP-9及TIMP-1mRNA的表达水平；④Res干预后用MTT法测定HaCaT细胞的增殖活性；⑤RT-PCR方法检测0.1mmol/L和0.5mmol/L的Res干预30mJ/cm2UVB照射HaCaT细胞24h后MMP-9、TIMP-1mRNA的表达水平以及Res干预90mJ/cm2UVB照射HaCaT细胞后MMP-1mRNA的表达水平。
　　结果①对照组细胞随培养时间的延长细胞增殖活性增加；经UVB辐射后，细胞增殖活性较相应时间点对照组下降，差异有统计学意义(P<0.05)。②对照组细胞MMP-1、MMP-9mRNA呈低水平表达，经30、60、90mJ/cm2的UVB照射后，HaCaT细胞中MMP-9mRNA相对含量高于相同时间点对照组(P<0.05)；不同实验组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)；90mJ/cm2UVB照射HaCaT细胞24h后，MMP-1mRNA呈高水平表达，与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)；经30、60、90mJ/cm2的UVB照射后，HaCaT细胞中TIMP-1mRNA的相对含量明显降低，与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。③不同浓度的Res对HaCaT细胞的增殖活性均未见明显影响，差异无显著统计学意义(P>0.05)。④0.1mmol/LRes干预24h后，HaCaT细胞MMP-1及MMP-9mRNA表达未见明显下降，TIMP-1mRNA表达无明显增强，与对照组相比无明显统计学意义(P>0.05)。0.5mmol/LRes干预24h后，HaCaT细胞MMP-1及MMP-9mRNA表达明显下降，TIMP-1mRNA表达增强，与对照组相比，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　结论①UVB能够抑制HaCaT细胞的增殖活性，导致HaCaT细胞MMPs表达增多及TIMPs表达下降，使二者比例失调，这可能与光老化的发生有一定关系。
　　②Res能修复UVB对HaCaT细胞增殖的损伤，通过下调MMP-1、MMP-9mRNA的表达，增加TIMP-1mRNA的表达以达到修复紫外线损伤的作用。