阿托伐他汀和N-乙酰半胱氨酸对大鼠对比剂肾病保护作用的研究

摘要

目的:
　　 本研究旨在通过建立大鼠对比剂肾病(ContrastInducedNephropathy;CIN)模型，使用阿托伐他汀和NAC对CIN大鼠进行干预，观察生化指标和肾脏结构的变化，探讨阿托伐他汀和NAC对大鼠CIN的保护作用及其作用机制。
　　 研究方法:
　　 1.制作大鼠CIN模型和分组:注射对比剂后48h或72h，大鼠Scr较基础值升高25％提示建模成功，将45只成年Wistar大鼠适应性喂养1周后，随机分为对照组(A组)、阿托伐他汀组（B组）和NAC组（C组），注射对比剂前3d和后2d，A组、B组、C组每天分别给予1.5ml生理盐水、阿托伐他汀(30mg/kg)、NAC(300mg/kg)灌胃;注射对比剂后72h处死，注射对比剂前和注射对比剂后48h和72h采血2ml检测血清肌酐(Scr)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;处死后留双侧肾脏标本。
　　 2.标本处理:所有标本均行HE染色和免疫组化染色;分离肾脏皮、髓质，将皮质切成若干个1mm3的立方体用于电镜观察;部分肾组织ELISA法测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)水平;部分肾脏组织匀浆WesternBlot法检测Bax和Bcl-2的蛋白表达;部分肾组织匀浆PCR法对VEGFmRNA表达进行半定量测定。
　　 结果:
　　 1.血清生化指标:术后48h，3组大鼠Scr、CRP、TNF-α水平较前均升高(P＜0.05);阿托伐他汀组、NAC组Scr、CRP、TNF-α水平均低于对照组(P＜0.05)，且阿托伐他汀组术后48hTNF-α水平低于NAC组(P＜0.05)。
　　 2.MDA、SOD和NO水平:(1)MDA的水平，阿托伐他汀组、NAC组均低于对照组，且阿托伐他汀组低于NAC组（P＜0.05）;(2)SOD和NO水平，阿托伐他汀组、NAC组均高于对照组，且阿托伐他汀组高于NAC组（P＜0.05）。
　　 3.Bax、Bcl-2蛋白表达:(1)对照组Bax蛋白表达高于阿托伐他汀组、NAC组(P＜0.05)，对照组Bcl-2蛋白表达均低于阿托伐他汀、NAC组(P＜0.05);(2)阿托伐他汀组、NAC组相比较，Bax、Bcl-2蛋白的表达，差异未见统计学意义。
　　 4.VEGFmRNA水平:阿托伐他汀组、NAC组VEGFmRNA水平低于对照组(P＜0.05);阿托伐他汀组和NAC组VEGFmRNA水平差异无统计学意义。
　　 5.肾脏病理形态变化:(1)光镜变化:对照组肾小管和肾间质可见大量炎症细胞浸润，肾小管上皮细胞严重肿胀、空泡样改变，肾小管管腔内可见大量管型，甚至闭塞。阿托伐他汀组、NAC组上述病变轻较，且阿托伐他汀组最轻;(2)电镜变化:对照组肾小管基底膜重度增厚，内皮细胞内线粒体肿胀严重、嵴排列紊乱、甚至消失，管腔面的微绒毛大量脱落，阿托伐他汀组、NAC组上述病变轻较，且阿托伐他汀组最轻;(3)免疫组化:3组均有TGFβ1表达，对照组、阿托伐他汀组、NAC组高表达比例分别为73.33％、26.67％、33.33％，阿托伐他汀组、NAC组与对照组相比较，TGFβ1表达均减弱(P＜0.05);阿托伐他汀组和NAC组TGFβ1表达水平差异未见统计学意义。
　　 结论:
　　 1.抗炎症、抗氧化应激可能是阿托伐他汀和NAC主要的肾保护机制。
　　 2.阿托伐他汀、NAC可能通过下调Bax蛋白表达和上调Bcl-2表达，减少肾小管上皮细胞的凋亡，对CIN的发生有一定的预防作用。
　　 3.阿托伐他汀、NAC还可减少VEGF、TGFβ1的过度表达，改善肾脏损害，可在一定程度上抑制CIN的发生。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1．材料和方法

1．1 材料

1．1．1 实验仪器及耗材

1．1．2 实验试剂

1．1．3 实验用液体的配置

1．1．4 实验动物

1．2 实验方法

1．2．1 模型的制备

1．2．2 取材

1．2．3 生化指标检测

1．2．4 肾脏形态学检测

1．2．5 统计学处理

2 结果

2．1 注射对比剂前后肾功能的变化

2．2 对比剂注射前后炎性因子CRP和TNF-α的变化

2．3 肾脏组织中MDA、SOD和NO测定

2．4 肾脏组织中Bax、Bcl-2的蛋白表达

2．5 肾脏VEGFmRNA表达的变化

2．6 大鼠肾脏病理形态的比较

2．6．1 光镜下肾脏形态学改变

2．6．2 电镜下肾脏形态学改变

2．6．3 免疫组化(α-SMA)染色结果

3 讨论

3．1 CIN的可能病理生理机制

3．2 C1N动物模型基本病理特点

3．3 阿托伐他汀、NAC对CIN的预防作用

3．3．1 抗炎症反应与CIN的预防

3．3．2 抗氧化应激与CIN预防

3．3．3 抗细胞凋亡与CIN预防

3．3．4 阿托伐他汀、NAC对CIN大鼠VEGF、TGFβ1表达的影响

3．3．5 阿托伐他汀、NAC对CIN预防作用的比较

不足与展望

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 对比剂肾病药物预防的研究进展

致谢