MTB快速液体培养和改良l-J培养INH药敏结果不一致原因探讨

摘要

目的：探讨结核分枝杆菌BACTEC MGIT960快速液体培养和改良罗氏培养法异烟肼药敏结果不一致的原因。
　　 方法：
　　 (1)采取的标本是BACTEC MGIT960快速液体培养法和改良L-J培养法异烟肼药敏结果不一致的20对临床分离株，每对菌株分为a菌(BACTEC MGIT960快速培养结果为异烟肼耐药)和b菌（改良L-J培养法结果为异烟肼敏感）。
　　 (2)联合应用VNTR和Spoligotyping两种基因分型方法对20对结核分枝杆菌菌株进行基因分型鉴定，判断是否为同源菌株。
　　 (3)通过对结核分枝杆菌INH耐药基因测序鉴定是否为异烟肼耐药。
　　 (4)通过Brooth7H9液体培养和改良罗氏培养两种方法分别对同一患者同次送痰的20对BACTEC MGIT960快速液体培养和改良罗氏培养法药敏检测结果不一致的结核分枝杆菌菌株进行异烟肼的MIC测定。
　　 结果：
　　 (1)基因分型结果:在本研究的20对结核分枝杆菌临床分离株中，基因分型相同菌株16对，基因分型不同菌株4对。
　　 (2)异烟肼耐药基因测序结果:在16对基因分型相同菌株中， INH耐药基因突变菌株12对，无INH耐药基因突变菌株3对，1对结果不确定;在4对基因分型不同的菌株中， INH耐药基因突变菌株3对，无INH耐药基因突变菌株1对。MGIT960系统总的符合率为π=12/15=80％。改良L-J总的符合率为π=3/15=20％。
　　 (3)异烟肼MIC值结果:a组菌分别用7H9液体培养及L-J固体培养比较异烟肼MIC值，P值为0.000＜0.05，有统计学差异;b组菌分别用7H9液体培养及L-J固体培养法比较异烟肼MIC值， P值为0.000＜0.05，有统计学差异。
　　 结论：
　　 (1)16对菌株Spoligotyping与VNTR基因分型均一致，说明为同源菌株;4对结核分枝杆菌菌株基因分型不同，说明为非同源菌株，病人可能存在多重感染。
　　 (2)在16对同源菌株中:有12对同源菌株发生了INH耐药基因突变，说明这12对菌株为INH耐药，且与BACTTEC MGIT960系统的药敏检测结果相符合;有3对同源菌株未发生INH耐药基因突变，说明这3对菌株为INH敏感，且与改良L-J培养方法的药敏检测结果相符合;有1对结果不确定。
　　 (3)12对同源菌株BACTEC MGIT960快速培养法和改良L-J培养法异烟肼MIC值结果不一致，且L-J固体培养法测得的INH MIC值比用7H9液体培养法测得的明显高。对于这些特殊结核分枝杆菌，当不同方法测得的药敏结果不一致时需要考虑到特殊细菌的不同方法检测的MIC值及药敏临界值不同的问题。
　　 (4)对于药敏结果存在差异的部分特殊耐药结核分枝杆菌菌株，在进行耐药性评价时应考虑是否存在多重感染、异质性耐药及药敏方法的不同，了解其耐药程度，更好地指导临床用药、个体化治疗，更有效地控制结核病及耐药结核病的传播。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究的目的、方法

1、材料

1．1 菌株情况

1．2 培养基配制

1．3 常用试剂配制

1．4 主要试剂

1．5 主要仪器及设备

1．6 引物序列

2、方法

2．1 技术路线

2．2 结核分枝杆菌培养及灭活

2．3 结核分枝杆菌基因组提取

2．4 试验步骤

2．4．1 菌种鉴定

2．4．2 Spoligotyping和MIRU-VNTR基因分型方法

2．4．3 异烟肼耐药基因测序

2．4．4 结核分枝杆菌异烟肼MIC测定

2．4．5 数据处理

3、结果

3．1 患者基本情况

3．2 Spoligotping和MIRU-VNTR基因分型结果

3．3 异烟肼耐药基因测序

3．4 12对结核分枝杆菌异烟肼MIC测定结果

3．5 结果小结

4、讨论

4．1 Spoligotyping和MIRU-VNTR的结果讨论

4．2 结核分枝杆菌耐INH机制及INH耐药基因测序结果讨论

4．3 12对同源结核分枝杆菌Middle brooth 7H9液体培养法和改良L-J培养法异烟肼MIC测定结果讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述 结核分枝杆菌基因分型和耐药性测定及异质性耐药研究进展

致谢