APN-1在糖尿病牙周炎SD大鼠牙槽骨中的表达及对其病理学改变的影响

摘要

目的：
　　检测糖尿病牙周炎SD大鼠牙周组织中脂联素、破骨细胞分化因子(ODF/RANKL)、骨保护素(OPG)的表达与牙周组织改建过程中病理学变化的关系。
　　方法：
　　90只8W龄的SD大鼠按不同造模方式分为三组:对照组（30只），牙周炎组（30只），糖尿病+牙周炎组（30只），分别通过按60m g/kg体重一次性腹腔内注射链脲佐菌素，建立大鼠糖尿病模型，牙周局部结扎联合涂菌建立SD大鼠牙周炎模型。通过测检测大鼠注射链脲佐菌素后，不同时间段的血糖及空腹胰岛素水平(Fins)及胰岛素抵抗指数(HOMA)，并与空白对照组对比来确认造模成功。通过直接观察SD大鼠牙龈组织炎症变化，病理组织学检测判断牙周炎模型造模成功。分别在造模成功后1个月、3个月、6个月，取三个实验组大鼠的牙周组织通过直接观察牙龈组织炎症变化，病理组织学检测判断牙周炎的程度。分别通过RT-PCR、western blot检测三个实验组大鼠的牙周组织脂联素破骨细胞分化因子(ODF/RANKL)、骨保护素(OPG)基因和蛋白的表达变化的含量。检测脂联素在糖尿病牙周炎SD大鼠牙周组织中表达的变化与破骨细胞分化因子(ODF/RANKL)、骨保护素(OPG)的关系及对牙周组织病理形态及预后的影响，从而为临床糖尿病伴有牙周炎的患者治疗提供理论依据。
　　结果：
　　1.造模3W后，糖尿病+牙周炎组SD大鼠血糖、空腹胰岛素水平(Fins)及胰岛素抵抗指数(HOMA)始终大于正常值，与空白对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.01)，表明造模成功。直接观察牙龈组织炎症变化和病理组织学检测判断牙周炎模型造模成功。
　　2.造模1个月、3个月、6个月，脂联素基因及蛋白在健康组SD大鼠牙周组织中表达水平最强，牙周炎组、2型糖尿病伴牙周炎组大鼠牙周组织中表达水平依次减弱;组间比较均有显著性差异，存在统计学意义(P＜0.05)。破骨细胞分化因子(ODF/RANKL)、骨保护素(OPG)基因和蛋白在2型糖尿病伴牙周炎组SD大鼠牙周组织中表达水平最强，牙周炎组大鼠牙周组织中表达水平依次减弱;在健康组SD大鼠牙周组织中表达最低，组间比较均亦有显著性差异，存在统计学意义(P＜0.05)。
　　3.造模成功后1个月、3个月、6个月，取三个实验组大鼠的牙周组织通过直接观察牙周组织炎症变化及病理组织学检测显示:2型糖尿病伴牙周炎组大鼠牙周组织炎症最明显、牙周炎组大鼠牙周组织炎症次之，在2型糖尿病组部分大鼠可见中度牙龈组织炎症，健康组大鼠牙周组织未见炎症。
　　结论：
　　1.牙周局部结扎联合涂菌能有效建立SD大鼠牙周炎模型，通过按60mg/kg体重一次性腹腔内注射链脲佐菌素法能有效建立SD大鼠糖尿病模型。
　　2.与健康组大鼠相比，造模成功后1个月、3个月、6个月2型糖尿病伴牙周炎组大鼠牙周组织炎症及骨丧失程度最明显、脂联素基因及蛋白表达最低。破骨细胞分化因子(ODF/RANKL)、骨保护素(OPG)基因表达最高。
　　3.与健康组大鼠相比，造模成功后1个月、3个月、6个月牙周炎组大鼠牙周组织炎症及骨丧失程度较明显，脂联素基因及蛋白表达较低。破骨细胞分化因子(ODF/RANKL)、骨保护素(OPG)基因表达较高。
　　4.糖尿病后牙周组织脂联素表达降低是牙周炎发病及加重的重要因素之一，脂联素表达降低通过反向调节破骨细胞分化因子(ODF/RANKL)、骨保护素(OPG)基因高表达发挥作用，为临床治疗和预防牙周炎提供新的理论依据。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

1 对象和方法

1．1 实验动物

1．2 主要药物和试剂

1．3 主要仪器设备

1．4 实验方法

1．4．1 实验分组和大鼠模型的制备

1．4．2 血清中脂联素的检测

1．4．3 组织学切片制备及HE染色

1．4．4 半定量逆转录聚合酶链式反应法

1．4．5 Western blot检测脂联素(adiponectin，APN)蛋白的表达

1．4．6 统计学分析

2 结果

2．1 大鼠糖尿病造模后血糖检测

2．2 大鼠糖尿病造模后空腹胰岛素水平及胰岛素抵抗指数检测

2．3 大鼠牙周炎造模成功检测指标

2．4 组织学结果观察

2．5 牙槽骨总RNA的鉴定和定量

2．6 APN mRNA、RANKL mRNA琼脂糖凝胶电泳成像

2．7 各组大鼠不同时间牙槽骨组织APN蛋白的表达

2．8 各组大鼠不同时间血浆APN蛋白的表达

3 讨论

3．1 脂联素的特性及生理作用

3．2 脂联素与骨改建的调节

3．3 糖尿病与脂联素的关系

3．4 脂联素与肥胖以及动脉硬化的关系

3．5 脂联素与牙龈组织炎症变化的关系

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 脂联素(adiponectin)的生物学功能研究进展

致谢