上转换纳米介导的光动力疗法体外杀伤脊髓星形胶质细胞的实验研究

摘要

目的:探讨以上转换荧光纳米颗粒为载体与光敏剂部花青540连接的纳米复合物(UCNPs-MC540)介导的光动力对大鼠脊髓星形胶质细胞的体外杀伤效应。
　　方法:(1)于无菌条件下体外分离新生1-2天的SD大鼠脊髓组织，制成细胞悬液，通过差速贴壁和恒温摇床震荡去除杂细胞，进行传代、培养。利用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色法鉴定脊髓星形胶质细胞。(2)成功分离提纯大鼠脊髓星形胶质细胞后，采用MTT法检测不同浓度UCNPs-MC540复合物，不同能量980纳米波长近红外激光照射对细胞活力的影响以及UCNPs-MC540联合980纳米近红外激光的光动力疗法的细胞杀伤效应;最后用透射电镜观察在200μg/ml UCNPs-MC540复合物浓度与近红外980纳米激光2000J/cm2能量照射下，星形胶质细胞细胞结构的改变。
　　结果:(1)体外分离培养的细胞具有典型的星形胶质细胞的形态，胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色阳性，证实为星形胶质细胞。(2)在不同浓度UCNPs-MC540(0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)与星形胶质细胞共培养后，细胞存活率的差异无统计学意义(P＞0.05);不同能量(0J/cm2、200 J/cm2、500 J/cm2、1000 J/cm2、2000 J/cm2)980纳米近红外激光照射体外培养的星形胶质细胞后，细胞存活率的差异无统计学意义(P＞0.05);不同浓度UCNPs-MC540与星形胶质细胞共培养12小时后给予2000J/cm2980纳米近红外激光照射，细胞存活率随着UCNPs-MC540浓度的增加而降低，差异有统计学意义(P＜0.05);在UCNPs-MC540浓度为100μg/ml与细胞共培养12小时后分别给予不同能量激光照射，随着激光剂量的增加，细胞存活率下降，各组间差异有统计学意义(P＜0.05)。(3)与空白对照组相比，在浓度为200μg/mlUCNPs-MC540复合物介导的光动力作用下，细胞呈现典型的凋亡样改变，线粒体受累，染色质凝聚边移，胞膜皱缩等改变。
　　结论:(1)新生SD大鼠的脊髓星形胶质细胞成功在体外分离，培养，传代及鉴定。(2)以上转换荧光纳米为载药体，联合光敏剂部花青540构建的纳米复合物UCNPs-MC540介导的光动力疗法对脊髓星形胶质细胞具有一定的体外杀伤效果，为今后脊髓损伤后抑制星形胶质细胞的增生，减少胶质瘢痕形成的治疗拓展了新的思路和方法。单纯给予纳米光敏复合物或单纯进行光照则无细胞杀伤效果，在一定程度上提示UCNPs-MC540的低毒性及单独接触980纳米激光是安全的。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、星形胶质细胞的体外培养及纯化

1．1 对象和方法

1．1．1 实验动物

1．1．2 实验设备

1．1．3 实验用具

1．1．4 实验试剂

1．1．5 实验步骤

1．2 结果

1．2．1 显微镜观察胶质细胞形态

1．2．2 GFAP免疫鉴定结果

1．3 讨论

1．4 小结

二、上转换纳米介导的光动力疗法体外杀伤星形胶质细胞的实验研究

2．1 对象和方法

2．1．1 组织来源

2．1．2 主要设备

2．1．3 实验用具

2．1．4 主要试剂

2．1．5 实验步骤和方法

2．1．6 统计学分析

2．2 结果

2．2．1 UCNPs-MC540对星形胶质细胞活力的影响

2．2．2 980nm激光对细胞的活力影响

2．2．3 不同能量激光照射对PDT效果的影响

2．2．4 不同浓度UCNPsP-MC540对细胞杀伤的影响

2．2．5 透射电子显微镜形态分析

2．3 讨论

2．4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述一 星形胶质细胞在脊髓损伤后的作用研究进展

综述二 上转换纳米载体在生物医学中的应用进展

致谢