转录因子Bach2在重型再生障碍性贫血和免疫相关性全血细胞减少症发病机制中的研究

摘要

目的：
　　通过研究重型再生障碍性贫血(Severe Aplastic Anemia，SAA)及免疫相关性全血细胞减少症（immuno-related pancytopenia,IRP）患者CD4+和CD8+T淋巴细胞 CD19+B淋巴细胞中转录因 Bach2、Blimp-1及血红素加氧酶-1（ heme oxygenase-1, HO-1）的表达水平及相关性分析，进一步阐明 SAA，IRP患者免疫损伤骨髓造血的具体过程及差异，有利于更全面地了解免疫相关的发病机制，从而为寻找预防、诊断和治疗SAA、IRP的新策略提供理论依据。
　　方法：
　　选取2014年8月至2016年3月期间入住天津医科大学总医院血液科的初治 SAA、IRP患者，治疗后缓解期复查的 SAA、IRP患者及正常对照者为研究对象。第一部分研究SAA患者中CD4+和CD8+T淋巴细胞中转录因子Bach2的表达，采用免疫磁珠方法分选SAA初治及缓解期患者各10例及10名健康正常人外周血CD4+或 CD8+T淋巴细胞，实时定量PCR检测分选细胞转录因子Bach2的表达水平。同时利用流式细胞学的方法检测CD4+或 CD8+T淋巴细胞中转录因子Bach2的表达水平及 CD8+T淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶 B的表达情况，并与转录因子Bach2的表达水平进行相关性分析。第二部分研究IRP患者中CD4+和CD8+T淋巴细胞及 CD19+B淋巴细胞中转录因子 Bach2的表达。以免疫磁珠阳性分选 IRP初治及缓解期患者各10例及10名正常健康人CD4+或 CD8+T淋巴细胞，实时定量 PCR检测分选细胞转录因子 Bach2的表达水平。同时利用流式细胞学的方法检测CD4+或 CD8+T淋巴细胞及CD19+B淋巴细胞中转录因子Bach2的表达水平。第三部分研究SAA及IRP患者中CD4+或 CD8+T淋巴细胞及CD19+B淋巴细胞中转录因子Bach2的下游靶标转录因子Blimp-1及血红素加氧酶-1的表达。以免疫磁珠阳性分选SAA初治及缓解期患者各10例，IRP初治及缓解期患者各10例及10名正常健康人CD4+或 CD8+T淋巴细胞，实时定量PCR检测分选细胞转录因子Blimp-1及血红素加氧酶-1的表达水平。同时利用流式细胞学的方法检测 CD4+或 CD8+T淋巴细胞及IRP患者CD19+B淋巴细胞中转录因子Blimp-1及血红素加氧酶-1的表达水平。并对转录因子Bach2与转录因子Blimp-1及血红素加氧酶-1的表达水平进行相关性分析。
　　结果：
　　第一部分（1）初治SAA患者外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞 Bach2 mRNA的表达均显著低于正常对照者(Mann-Whitney U检验，P<0.05)。免疫抑制治疗后，缓解期患者外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞Bach2 mRNA的表达和初治组相比明显上升(Mann-Whitney U检验，P<0.05)。（2）流式细胞检测初治SAA患者外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞内Bach2的中位表达分别为39.04(24.45-54.20)％和40.86(26.20-80.20)%，正常对照者外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞Bach2的中位表达分别为53.64(33.28-86.72)%和64.98(47.00-92.70)%。初治SAA患者外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞内Bach2的表达均显著低于正常对照组(P<0.05)。免疫抑制治疗后，缓解患者外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞内Bach2的表达分别为63.93（40.4-95.56）%和74.05(46.84-91.85)%，和初治组相比均明显升高(P<0.05)。（3）全体观察对象外周血CD8+T淋巴细胞内穿孔素的表达与其Bach2的表达呈显著负相关(r=-0.684,P<0.05)。外周血CD8+T淋巴细胞内颗粒酶B的表达与Bach2的表达亦呈显著负相关(r=-0.389,P<0.05)。
　　第二部分（1）IRP初治患者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞内Bach2的mRNA表达水平较正常对照者无显著差异(Mann-Whitney U检验，P>0.05)。（2）流式细胞检测初治IRP患者外周血CD4+及CD8+T细胞内Bach2的中位表达分别为44.53(26.40-64.00)%和59.23(36.19-82.12)%，正常对照者外周血CD4+及CD8+T细胞Bach2的中位表达分别为53.64(33.28-86.72)%和64.98(47.00-92.70)%。初治IRP患者外周血CD4+及CD8+T细胞内Bach2的表达和正常对照组相比均无显著差异(P﹥0.05)。初治IRP患者外周血CD19+B淋巴细胞内Bach2的中位表达为86.57(78.33-92.24)%，正常对照者外周血CD19+B淋巴细胞内Bach2的中位表达为85.14(69.39-92.56)%。初治IRP患者外周血CD19+B淋巴细胞内Bach2的表达较正常对照组无显著性差异(P>0.05)。(3)SAA初治患者外周血CD8+T淋巴细胞内Bach2的mRNA以及流式检测的表达水平较IRP初治组均显著降低(P<0.05)。
　　第三部分（1）SAA患者外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞内Blimp-1及HO-1的mRNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均显著升高(P<0.05)，免疫抑制治疗后明显下降(P<0.05)。（2）IRP患者外周血CD19+B淋巴细胞内Blimp-1流式检测的表达水平较正常对照者显著升高(P<0.05)，免疫抑制治疗后明显下降(P<0.05)。IRP患者外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞内Blimp-1的QPCR检测mRNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均无显著差异(P﹥0.05)。（3）IRP患者外周血CD4+T淋巴细胞及CD19+B淋巴细胞内HO-1流式检测的表达水平较正常对照者均显著升高(P<0.05)，免疫抑制治疗后明显下降(P<0.05)。IRP患者外周血CD8+T淋巴细胞内HO-1的QPCR检测mRNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均无显著差异(P﹥0.05)。（4）全体观察对象 CD4+及CD8+T淋巴细胞内Blimp-1及HO-1与Bach2的表达呈显著负相关(P<0.05)，IRP患者CD19+B淋巴细胞内Blimp-1与Bach2呈显著负相关(P<0.05)；HO-1与Bach2呈不显著负相关(P>0.05)。
　　结论：
　　（1）SAA初治患者外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞内Bach2的QPCR检测的mRNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均显著降低，经免疫抑制治疗后显著上升。
　　（2）IRP患者外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞及CD19+B淋巴细胞内Bach2的QPCR检测mRNA表达水平以及流式检测表达水平较正常对照者均无显著差异。SAA初治患者外周血CD8+T淋巴细胞内Bach2的mRNA表达水平以及流式检测的表达水平较IRP初治组均显著降低。
　　（3）SAA患者外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞内Blimp-1及HO-1的QPCR检测的mRNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均显著升高，经免疫抑制治疗后显著下降。
　　（4）IRP患者外周血CD19+B淋巴细胞内Blimp-1流式检测的表达水平较正常对照者显著升高，免疫抑制治疗后明显下降。IRP患者外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞内Blimp-1的QPCR检测mRNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均无显著差异。IRP患者外周血CD4+T淋巴细胞及CD19+B淋巴细胞内HO-1流式检测的表达水平较正常对照者均显著升高，免疫抑制治疗后明显下降。IRP患者外周血CD8+T淋巴细胞内HO-1的QPCR检测mRNA表达水平以及流式检测的表达水平较正常对照者均无显著差异。
　　（5）全体观察对象 CD4+及CD8+T淋巴细胞内Blimp-1及HO-1与Bach2呈显著负相关，IRP患者CD19+B淋巴细胞内Blimp-1与Bach2呈显著负相关；HO-1与Bach2呈不显著负相关。

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缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、重型再生障碍性贫血患者CD4+及CD8+T淋巴细胞中转录因子Bach2的表达水平

1.1对象和方法

1.2结果

1.3讨论

1.4 小结

二、免疫相关性全血细胞减少症患者T淋巴细胞及B淋巴细胞转录因子Bach2的表达水平

2.1对象和方法

2.2结果

2.3讨论

2.4 小结

三、重型再生障碍性贫血及免疫相关性全血细胞减少症患者淋巴细胞中转录因子 Bach2 下游靶标转录因子 Blimp-1 及HO-1的表达

3.1对象和方法

3.2 结果

3.3讨论

3.4小结

全文结论

论文创新点

参考文献

发表文章及参与科研情况

综述:转录因子Bach2调控免疫系统的研究进展

致谢

个人简历