抵挡汤早期干预调控TGF-β/Smads信号通路、AngⅡ、CTGF因子对2型糖尿病大鼠大血管纤维化的影响

摘要

目的：本课题从糖尿病大血管纤维化的角度着手，建立2型糖尿病大鼠模型，通过不同时期给予2型糖尿病大鼠不同干预，探究抵挡汤干预通过TGF-β/Smads途径、CTGF、AngⅡ因子调节细胞外基质进而影响大血管纤维化的机制，运用抵挡汤破血逐瘀的功效，结合中医“治未病”理论，揭示抵挡汤对2型糖尿病大血管的保护作用。
　　方法：采用健康SD雄性大鼠150只，予普通饲料适应性饲养1周。随机抽取20只大鼠作为正常对照组，喂养普通饲料，其余大鼠作为造模组，喂养高脂饲料。8周后，取空腹内眦静脉血，对空腹血糖和血清胰岛素水平进行检测。随机从造模组中选取出现胰岛素抵抗的20只大鼠，作为抵挡汤早期组，予抵挡汤灌胃，4周后开始造模。除正常对照组外，其余大鼠尾静脉注射链脲佐菌素，正常对照组仅注射相同剂量的枸橼酸缓冲液。一周后取大鼠尾静脉血测随机血糖，血糖高于16.7mmol/L视为造模成功。造模成功的大鼠（117只大鼠），除抵挡汤早期干预组（19只大鼠，造模前4周给药），其余大鼠按体重、血糖分层随机分成糖尿病模型组（20只大鼠）、抵挡汤中期干预组（20只大鼠，成模时给药）、抵挡汤晚期干预组（20只大鼠，成模后4周给药）、氨基胍组（19只大鼠，成模时给药）、吡格列酮组（19只大鼠，成模时给药）。糖尿病模型组及正常对照组均每日给予等量无菌饮用水灌胃。实验于24周时结束取材，酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠血清中的TGF-β、AngⅡ及CTGF含量，实时荧光定量PCR（real time qPCR）检测大鼠主动脉TGF-β、CTGF、AngⅡ、Smad2、Smad3 mRNA表达水平；Western Blot检测大鼠主动脉TGF-β1蛋白表达水平。光镜下观察各组大鼠胸主动脉的形态学变化。实验过程中监测干预前后大鼠的一般情况及血糖、血脂的变化。
　　结果：Elisa实验结果表明，与正常对照组相比，糖尿病模型组大鼠血清TGF-β、CTGF、AngⅡ含量明显升高（P<0.01），与糖尿病模型组相比，抵挡汤早、中期干预组、氨基胍组及吡格列酮组TGF-β、CTGF、AngⅡ含量均明显下降（P<0.05），且抵挡汤早期干预组TGF-β、CTGF、AngⅡ含量显著低于抵挡汤中、晚期干预组（P<0.01）；Real time qPCR实验结果表明，与正常对照组相比，糖尿病模型组TGF-β、CTGF、AngⅡ、Smad2、Smad3 mRNA表达水平均显著升高（P<0.01），与糖尿病模型组相比，抵挡汤早、中、晚期干预组、氨基胍组TGF-β、CTGF、AngⅡ、Smad3 mRNA表达水平均显著下降（P<0.05），且抵挡汤早期干预组中TGF-β、CTGF、AngⅡ、Smad3 mRNA表达水平显著低于抵挡汤中、晚期干预组（P<0.05），而Smad2 mRNA表达水平仅抵挡汤早期干预组显著下降（P<0.05）。Western Blot实验结果表明，与正常对照组相比，糖尿病模型组TGF-β1蛋白表达水平显著升高（P<0.01），与糖尿病模型组相比，抵挡汤早、中期干预组及氨基胍组TGF-β1蛋白表达水平均显著下降（P<0.05），且抵挡汤早期干预组中TGF-β1蛋白表达水平显著低于抵挡汤晚期干预组（P<0.05）。光镜下观察胸主动脉可以发现，与正常对照组相比，糖尿病模型组可见动脉内膜不完整，内皮细胞大部分缺失，有脂质沉积，中膜排列紊乱，平滑肌细胞有变性、坏死，并有明显炎细胞浸润。经抵挡汤早期干预后，动脉内膜则相对完整，内皮细胞少量缺失，少量脂质沉积，中膜排列整齐，平滑肌细胞变性、坏死少见，有少量的炎细胞。经抵挡汤中晚期干预后，虽内膜较完整，但内皮细胞存在不同程度的缺失且中膜排列紊乱，少数细胞变性或坏死。
　　结论：抵挡汤早期干预能够下调T2DM大鼠血清中的TGF-β、AngⅡ及CTGF含量，主动脉 TGF-β、Smad2、Smad3、AngⅡ、CTGF mRNA基因表达水平及TGF-β1蛋白表达水平，推测抵挡汤早期干预通过抑制AngⅡ、TGF-β/Smads信号传导通路及CTGF因子，进而调节细胞外基质合成、分解的平衡，减少大血管纤维化的发生。

目录

声明

缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、2型糖尿病大鼠模型的制备及取材

1.1对象和方法

1.2结果

1.3 讨论

1.4 小结

二、抵挡汤对糖尿病大血管纤维化的影响

2.1 对象和方法

2.2 结果

2.3 讨论

2.4小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:抵挡汤治疗2型糖尿病大血管病变的研究进展

致谢

个人简历