选择性免疫调节干预脑出血的前临床探索

摘要

研究背景及目的：
　　脑出血作为脑卒中的一种亚型，通常指血管破裂所引起的脑实质内出血，常引起很高的致死率和致残率。截至目前，尚缺乏有效的治疗手段。随着人口老龄化的加重，更需要引起重视。脑出血病理机制复杂，初级损害常常由血肿引起的机械占位效应引起，继而引发次级损害，即由血肿周围的水肿所引发的占位效应、炎症、凋亡和坏死导致。针对初级损害目前尚缺乏有效的治疗手段，而针对脑出血后脑水肿所引发的不良结果，目前已有一些研究表明针对其干预的有效性，尤其是脑出血后炎症免疫反应在脑损伤中的作用，可作为可能有效的干预靶点。
　　磷脂酰鞘氨醇1（S1P）作为G蛋白偶联受体调节剂具有S1P1-S1P5这5个亚型，在细胞内和细胞外调节过程中均发挥重要作用。新近研究表明芬戈莫德（FTY720）作为口服治疗多发性硬化的非选择性S1P受体调节剂能够改善实验动物和患者脑出血后的神经功能缺损并减轻脑水肿，并主要通过 S1P1受体发挥作用。同时，一些研究也表明其非选择性的调节作用也可能引起不良反应。RP101075作为选择性S1P1受体调节剂具备优越的特异选择性和良好的心血管安全性。本实验旨在研究特异性选择性免疫性调节S1P1受体在实验性脑出血模型中的治疗作用及可能的机制探索。
　　研究方法：
　　本实验分别采用C57BL/6小鼠和Rag2-/-小鼠作为实验对象，采用自体血注射诱导脑出血模型。脑出血小鼠随机分成假手术组、安慰剂治疗组、RP101075治疗组、RP101075和W146（S1P1受体阻滞剂）共同治疗组和FTY720治疗组，采用灌胃的给药方式连续给药3天，并从术后30分钟后开始给药，每天给药一次，并在术后相应时间点应用改良神经功能评分、转角实验、前爪放置实验对实验鼠进行神经功能评价，同时包括14天的生存率评价，利用核磁、干湿重方法评价脑水肿，应用核磁评价血肿体积，血红蛋白定量测定脑血肿含量，并应用流式细胞术、免疫荧光、酶联免疫吸附试验测定脑内和外周的免疫炎性细胞浸润，包括小胶质细胞、星形胶质细胞、中性粒细胞、白细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞、B细胞、炎症因子TNF-α、IL-1β表达，应用伊文斯兰定量定性测定血脑屏障渗漏和蛋白印迹法检测紧密连接蛋白表达，以及体内体外对神经元凋亡的检测。
　　研究结果：
　　选择性S1P1受体调节剂RP101075能够有效改善脑出血小鼠的神经功能缺损、生存率和脑水肿。W146能够阻滞RP101075在脑水肿和神经功能方面的治疗作用。同时，RP101075能够减少小鼠脑出血后脑内和外周淋巴细胞、中性粒细胞、小胶质细胞浸润和炎症因子表达，并且能够提高血脑屏障完整性、减少神经元凋亡。
　　研究结论：
　　研究表明选择性S1P1受体调节剂RP101075能够在实验性脑出血中提供神经保护功能，同时鉴于其药理学方面的优势，说明利用RP101075选择性调节S1P1受体在实验性脑出血中具备有效的治疗作用和转化研究价值，值得进一步研究。

目录

声明

缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

对象和方法

1.1 实验动物

1.2 小鼠脑出血模型

1.3 实验设计和给药方案

1.4 神经功能评价和远期生存率评估

1.5 药理学质谱分析

1.6 脑出血血肿评价

1.7 脑出血水肿评价

1.8 流式细胞术检测中枢以及外周免疫

1.9 免疫荧光染色

1.10 血脑屏障渗漏以及完整性评估

1.11 Western-blot检测紧密连接蛋白表达

1.12 神经元凋亡检测

1.13 统计分析

2．结果

2.2 脑出血后的脑水肿可通过特异性S1P1受体调节剂减轻。

2.3 特异性S1P1受体调节可影响脑出血后中枢和外周的免疫应答。

2.4 特异性S1P1受体调节剂对于脑出血后治疗作用不完全依赖于免疫系统调节

2.5 特异性S1P1受体调节剂对脑出血后血脑屏障完整性的改善。

2.6 特异性S1P1受体调节剂的神经保护作用。

3．讨论

全文结论

论文创新点

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述:脑出血后S1P受体调节通路及干预

致谢

个人简历