H19调控的肿瘤相关巨噬细胞促进肝细胞肝癌侵袭转移的机制探讨

摘要

目的：探讨活化的肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associnated macrophages，TAMs）对肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）侵袭转移和干性特征的影响，并进一步探讨其潜在的分子机制。 方法：生物信息学分析64例HCC基因芯片信息，探讨局部分化抗原群68（Cluster of Differentiation68，CD68）阳性（CD68+）TAMs的浸润和Long non-coding RNA H19（H19）的相关性及H19与miR193b和MAPK之间的相关性。随机选取64例经部分肝切除术治疗的HCC患者石蜡组织切片标本，同时收集患者的临床病理资料，利用免疫组织化学技术（Immunohistochemical，IHC）检测CD68和CD163、神经细胞型钙黏蛋白（N-cadherin）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）和β-连接素（β-catenin）的表达，分析H19的表达和CD68，CD163及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）相关蛋白表达的相关性，同时分析H19表达和HCC患者总生存期（overall survival，OS）之间的关系及临床病理指标之间的相关性。在细胞学水平，活化的TAMs与Hep3B和HepG2细胞共孵育，利用RT-PCR和Western Blot法检测TAMs对HCC细胞EMT的影响；利用划痕修复实验和Transwell侵袭实验探究TAMs对HCC细胞侵袭转移的影响；利用成球实验和流式细胞实验探究TAMs对HCC细胞干性特征的影响。利用RT-PCR探究TAMs对HCC细胞中H19，miR193b及miR193b下游靶基因的影响；利用荧光素酶报告基因实验探究H19，miR193b和MAPK之间的关系；利用H19质粒转染，探究H19对HCC细胞侵袭转移和干性特征的影响。 结果：生物信息学分析提示：在HCC中H19表达和TAMs具有显著的相关性，在组织学水平进一步在证实H19和TAMs浸润数呈现显著的正相关关系，在细胞学水平发现活化的TAMs可以显著提高HCC细胞H19的表达水平。进一步在细胞学水平发现活化的TAMs可以促进HCC细胞的增殖功能，同时可以抑制其凋亡。活化的TAMs还可以促进HCC的侵袭转移功能和干性特征。进一步探讨活化的TAMs促进HCC侵袭转移的机制，生物信息学分析提示：在HCC中存在H19-miR193b-MAPK调节轴。在细胞学水平，发现活化的TAMs促进H19表达升高后并不影响miR193b表达量的改变，而其下游靶基因EGFR，PTEN和KRAS的转录明显升高，且具统计学差异，同时MAPK的转录和表达升高；荧光素酶报告基因实验证实H19和miR93b之间存在靶向关系，同时MAPK是miR193b的下游靶基因。因此在细胞学水平证实在HCC中存在H19-miR193b-MAPK调节轴，即在HCC中TAMs促进H19的表达，进而启动H19-miR193b-MAPK调节轴促进HCC的侵袭转移和干性特征。通过本研究为TAMs促进HCC侵袭转移机制提供了新的方向，以期为肿瘤的靶向治疗提供新的策略。

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