血样中痕量药物检测用快速样品前处理和分析体系的构建

摘要

随着药物研发和医学检测技术的发展，血液样品中痕量药物的检测成为主要的研究内容。液质联用技术由于具有极高的灵敏度，被广泛地应用于这一领域。但是它所使用的质谱检测器比较精密，易受到血样基质的干扰，所以需要使用净化效果好的快速前处理和色谱分离技术与之配套，以改善检测结果，同时提高仪器使用效率，减轻仪器所受生物基质的污染，从而降低仪器的使用和维护成本。
　　本论文研究了一种用于液质联用检测血样中痕量药物的快速样品前处理和快速色谱分离的技术体系。它采用了丙烯酸接枝改性的聚砜中空纤维膜对血液样品进行快速离心过滤，然后利用基于壳层硅胶的C18反相限进介质材料色谱柱进行快速色谱分析。该体系有效地去除了血样中的蛋白质和磷脂，提高了液质联用检测血样中痕量物质的回收率、灵敏度、准确性、精确度和效率。由于其使用方式简单、速度快，降低了血样中痕量药物检测的成本，可广泛地应用于临床检测和药物代谢研究领域。
　　首先以高能辐射的方式对聚砜中空纤维膜进行接枝改性。通过优化接枝工艺，以丙烯酸为单体接枝得到具有合适截留能力的聚砜中空纤维膜，其具有良好的物理截留蛋白质和化学吸附磷脂的能力。以它制得中空纤维膜离心组件，应用于血浆样品中痕量药物检测时的样品前处理，通过条件优化和其他方法的对比，结果表明该前处理技术具有回收率高、净化效果好、速度快、使用方便等特点。
　　其次，本研究研制了2.7μm的壳层硅胶，并以其键合了一种限进介质C18反相色谱填料。使用它装填的液相色谱柱可以用高流速的流动相进行快速高效的色谱分离，提高了液质联用仪的使用效率。它具有排阻蛋白质的能力，使之在死时间出峰，避免了对痕量目标药物的干扰;而且其固定相具有疏水亲水的两性性质，增加了磷脂的色谱保留，避免磷脂对保留稍弱的痕量目标药物的干扰。它耐受血样中生物基质，相比于普通的C18色谱柱具有较长的使用寿命。
　　96孔板式的丙烯酸接枝聚砜中空纤维膜离心组件和壳层硅胶键合C18反相限进介质色谱柱相结合，为血样中痕量药物的液质联用检测提供了消除基质干扰的方案。通过对实际血样中模型药物进行检测的应用研究，构建了血样中痕量药物检测的快速样品前处理和快速色谱分离的技术体系。实验结果表明，该体系可有效去除血样中蛋白质和磷脂的干扰，对血样中酸性、碱性、极性、非极性和两性的痕量模型药物具有良好的回收率，检测结果灵敏度好、重现性好、精确度高，所需的样品前处理和分析检测的时间短，通量高，适用于血样中痕量药物的快速液质联用检测。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 血液样品中痕量药物的检测

1．1．1 血液样品中痕量药物检测的意义

1．1．2 血液样品的组成

1．1．3 血液样品中痕量药物检测技术的现状和发展趋势

1．2 液质联用技术用于血液样品的检测

1．2．1 液质联用技术及其发展和应用

1．2．2 液质联用技术检测血样中痕量药物面临的问题和对策

1．3 液质联用技术检测血样中痕量药物时的样品前处理

1．3．1 现有的血液样品前处理技术及问题

1．3．2 中空纤维膜用于血液样品前处理的研究

1．4 液质联用技术检测血液样品中痕量药物的色谱分离技术

1．4．1 色谱分离技术的发展历史和趋势

1．4．2 快速分析色谱技术

1．4．3 限进介质填料技术

1．5 课题提出

1．5．1 课题的意义

1．5．2 课题的主要研究内容

第二章 中空纤维膜的改性与性能表征

2．1 序言

2．2 实验部分

2．2．1 实验材料和仪器

2．2．2 材料制备

2．2．3 丙烯酸接枝聚矾中空纤维膜的结构表征

2．2．4 不同接枝方式的聚砜中空纤维膜的性能测试

2．2．3 丙烯酸接枝聚矾中空纤维膜的结构表征

2．2．5 优化后的膜组件应用于血样前处理的性能测试

2．3 结果与讨论

2．3．1 聚砜中空纤维膜的丙烯酸接枝

2．3．2 丙烯酸接枝聚砜中空纤维膜的结构表征

2．3．3 不同接枝方式的聚砜中空纤维膜的性能测试

2．3．4 优化后的膜组件应用于血样前处理的性能测试

2．4 本章小结

第三章 基于壳层硅胶的C18反相限进介质的研制

3．1 序言

3．2 实验部分

3．2．1 实验原料和仪器

3．2．2 壳层硅胶的研制

3．2．3 壳层硅胶的性能测试

3．2．4 基于壳层硅胶的限进介质材料的研制

3．3 结果与讨论

3．3．1 壳层硅胶的制备

3．3．2 壳层硅胶键合C18反相限进介质的制备

3．4 本章小结

第四章 适用于血样中痕量药物检测的快速检测体系的构建及应用

4．1 序言

4．2 实验部分

4．2．1 实验材料和仪器

4．2．2 适用于血样中痕量药物检测的快速检测体系的构建

4．2．3 适用于血样中痕量药物检测的快速检测体系的应用

4．3 结果与讨论

4．3．1 适用于血浆中痕量药物检测的快速检测体系的构建

4．3．2 适用于血样中痕量药物检测的快速检测体系的应用

4．4 本章小结

第五章 结论

参考文献

发表论文和参加科研情况

致谢